论文摘要
【背景与目的】JAK/STST信号转导途径在多种细胞生长、活化、分化和凋亡等功能表达中发挥着十分重要的作用,它可以促发带有酪氨酸残基的蛋白发生磷酸化,产生激酶活化的级联反应,并将活化的信号传导给下游的其他分子,引发一系列基因和蛋白水平的变化。近年来国外学者发现PV、ET、IMF这一类的慢性骨髓增殖性疾病存在一致性的基因突变-JAK2V617F,这一发现对于理解这一类疾病的分子机理具有重要的意义,对于其诊断、鉴别诊断具有指导意义,同时为其靶向治疗提供了新的思路。鉴于国内尚无类似的报道,我们检测了137例MPD患者的JAK2V617F突变发生情况,研究其在国内CMPD患者中的分布,建立可行可信的方法用于临床检测,同时,通过体外实验研究酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼及JAK2激酶抑制剂AG490在这类疾病的靶向治疗中的潜能。【方法】在实验的第一部分中,我们检测了137例MPD患者的JAK2V617F突变发生情况。137例MPD患者为我院2000年4月至2006年4月就诊患者。按照WHO分型诊断标准,其中PV患者57例,ET患者68例,IMF患者12例,20例正常对照为我院体检正常者。主要研究方法为:（1）基因组DNA提取;（2）等位基因特异性PCR方法扩增JAK2基因第12号外显子,通过对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳的方法筛选出JAK2V617F阳性患者,对部分阳性患者的PCR产物回收后进行测序;（3）分析患者的临床及实验室资料以了解JAK2V617F阳性患者的细胞遗传学特征及临床特征;在实验的第二部分中,我们将不同浓度的伊马替尼、AG490作用于HEL细胞系和K562细胞系,在72小时用CCK-8kit试剂盒检测增殖抑制率,流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响。【结果】1.137例MPD患者共检出90例JAK2V617F阳性,总阳性率65.69%;其中PV57例,阳性率73.68%; ET68例,阳性率58.82%;IMF12例,阳性率66.67%;PV及ET患者JAK2V617F阳性组年龄比阴性组年龄高,差别有显著意义（P<0.05）。115例进行过染色体检查的病人中7例存在核型异常,其中JAK2V617F阳性5例,阳性率为71.43%;染色体核型正常者108例,JAK2V617F阳性74例,阳性率68.51%;两组差别无统计学意义。ET患者JAK2V617F阳性组白细胞计数较阴性组高,差别有显著意义（P<0.05）;阳性组血红蛋白与血小板计数较阴性组高,但差别无显著意义。2.伊马替尼可显著抑制HEL细胞系的生长,呈剂量依赖性。其作用于HEL细胞系的IC50较K562细胞明显增高;AG490在50μM时可显著诱导两种细胞凋亡,其在72h时诱导K562细胞系凋亡的细胞占56.2%,诱导HEL细胞系凋亡的细胞占60.6%。低浓度AG490对细胞系作用效果不明显。【结论】1.中国PV、ET、IMF患者中JAK2V617F发生率较高,其发生与年龄存在相关性,年龄大者较易发生;2.进行JAK2V617F检测有助于CMPD的诊断;3.等位基因特异性PCR方法检测JAK2基因突变方法简单,结果可靠,适用于临床开展。4.存在染色体核型组JAK2V617F发生率较核型正常组略高。5.JAK2V617F突变阳性组患者外周血细胞计数较阴性组高。6.伊马替尼对HEL细胞系具有明显的抑制增殖作用和促进凋亡作用,呈剂量依赖性,但其IC50较作用于K562细胞高。7.50μM的AG490对HEL、K562细胞系具有明显的促进凋亡作用。
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标签：慢性骨髓增殖性疾病论文; 基因论文; 突变论文; 伊马替尼论文; 靶向治疗论文;