WT1基因及其异构体在白血病中表达与临床应用

论文题目: WT1基因及其异构体在白血病中表达与临床应用

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科血液学

作者: 顾伟英

导师: 陈子兴

关键词: 白血病,实时定量,逆转录聚合酶链反应,微小残留病,细胞,异构体,免疫治疗

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者和急性白血病(AL)患者不同病程阶段、不同亚型之间骨髓细胞中WT1 的表达水平及其与临床预后、监测微小残留病(MRD)的关系;尤其是白血病患者接受异基因骨髓移植(allo-BMT)后骨髓细胞中WT1 的动态表达水平在监测MRD 中意义。同时探讨不同白血病细胞株及不同亚型急性白血病患者中WT1(+17AA)/(-17AA)异构体表达,以及WT1(+17AA)/(-17AA)异构体表达的改变与NB4 细胞诱导分化的关系。探讨WT1 肽特异性CTL 对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用。方法建立实时定量RT-PCR 方法,采用LightCycler PCR 仪检测了15 例初诊CML 患者、108 例不同病程阶段AL 患者、15 例白血病患者allo-BMT 前后(111例次)和23 例非白血病患者骨髓中WT1 及内参GAPDH 的表达水平,以WT1N =(WT1 拷贝数/GAPDH 拷贝数)×10~4 计算WT1 表达水平,详细记录所选患者的临床资料。同时检测NB4 细胞诱导分化过程中WT1 及WT1(+17AA)异构体动态变化,计算WT1N(+17AA)值,并用流式细胞仪检测NB4 细胞表面抗原CDllb 的变化。采用MJ PCR 仪检测K562、SHI、Jurkat、NB4、NB4/WT1A、NB4/WT1D 等白血病细胞株及79 例初诊急性白血病患者骨髓中WT1 基因和WT1(+17AA)异构体表达水平,以ABL 基因作为内参,计算WT1(+17AA)/WT1 比值。WT1、WT1(+17AA)异构体及ABL 基因引物及探针序列均由Primer Priemer5.0 引物设计软件。合成一段针对HLA-A*0201 的WT1 特异性9 聚肽(CMTWNQMNL),负载树突状细胞(DC)后体外诱导产生WT1 肽特异性、HLA-A*0201 限制的细胞毒T 淋巴细胞(CTL),MTT 法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应。采用SPSS 10.0 统计软件,计量资料呈非正态分布,用中位数(Median)描述,采用非参数分析各组间差异(Mann-Whitey U 检验和Kruskal Wallis Test),非参数相关分析(Spearman)WT1 基因与相关变量间关系;重复实验数据采用一元方差分析(One-Way ANOVA)各组之间差异,以P<0.05 为显著统计学差异。以WT1 基因高表达的K562 细胞株为阳性

论文目录:

引言

第一部分实时定量RT-PCR检测白血病患者骨髓细胞中WT1基因表达

第二部分实时定量RT-PCR检测WT1监测白血病患者异基因骨髓移植后微小残留病

第三部分 N84 细胞诱导分化过程中WT1(+17AA)异构体表达的研究

第四部分 WT1(+17AA)/(-17AA)异构体在白血病中表达

第五部分 WT1 肽诱导CTL 杀伤白血病细胞实验研究

结论

综述:实时定量PCR技术及其检测白血病患者WT1基因表达的临床评价

缩略词表

发表论文

致谢

发布时间: 2006-03-24

参考文献

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