SDS-PAGE与HPLC检测食品中大豆蛋白的方法研究

论文摘要

本实验首先通过单因素试验得出面制品中大豆分离蛋白的SDS-PAGE分离分析方法条件为：分离胶浓度为12%、上样量为20μL、电压为120V时，得到的凝胶图谱效果较好，各个亚基都完全分离开，条带比较清晰。回归方程为Y＝1.7867X＋2.0742，相关系数为0.9911，精密度实验相对标准偏差为6.57%；牛奶中大豆分离蛋白的SDS-PAGE分离分析方法条件为：用丙酮去除脂肪、分离胶浓度为12%、上样量为30μL、电压为120V时，得到的凝胶图谱效果较好，各个亚基都完全分离开，条带比较清晰。回归方程为Y＝27.913X＋7.5036，相关系数为0.9922，方法精密度实验相对标准偏差为7.06%；火腿肠中大豆分离蛋白的SDS-PAGE分离分析方法条件为：用丙酮去除脂肪、分离胶浓度为12%、上样量为20μL、电压为100V时，得到的凝胶图谱效果较好，各个亚基都完全分离开，条带比较清晰。回归方程为Y＝2.7609X-0.3838，相关系数为0.9941，方法精密度实验相对标准偏差为6.85%。其次得出了面制品中大豆分离蛋白的HPLC分离分析方法条件为：样品用0.3%乙酸的乙腈提取，乙酸做离子对试剂，检测波长为254nm，柱温为45℃时，得到的色谱谱图峰形对称，各组分能完全分开。大豆分离蛋白的加标平均回收率为96.20%，标准偏差为2.57%，回归方程为Y＝5433.8X-3537.1，相关系数为0.9984。方法检出限（3S/N）为0.38%（w/w），定量限（10S/N）为1.29%（w/w）；牛奶中大豆分离蛋白的HPLC分离分析方法条件为：样品用pH9.0磷酸盐提取，检测波长为254nm，柱温为45℃，流动相为12min内乙腈浓度从1%-42%，1min内从42%-100%时，分离效果最好。大豆分离蛋白的加标平均回收率为97.90%，标准偏差为2.47%，回归方程为Y=1E+06X-7068.8，相关系数为0.9998。方法检出限（3S/N）为0.3144mg/mL，定量限（10S/N）1.0479mg/mL；火腿肠中大豆分离蛋白的HPLC分离分析方法:样品用pH9.60碳酸盐溶液提取，检测波长254nm，柱温45℃，流动相的线性梯度为3min内乙腈浓度从5%–25%,3min内从25%–42%,7min内从42%–50%时，分离效果最好，大豆分离蛋白的加标平均回收率为99.30%，标准偏差为2.04%，回归方程为Y＝2923.1X-970.85，相关系数为0.9942。方法检出限（3S/N）为0.33%（w/w），定量限（10S/N）为1.10%（w/w）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 概述
• 1.2 大豆蛋白的营养特性
• 1.3 大豆蛋白的功能特性
• 1.3.1 保水性
• 1.3.2 乳化性
• 1.3.3 吸油性
• 1.3.4 起泡性
• 1.3.5 粘着性
• 1.3.6 凝胶性
• 1.4 大豆蛋白在食品工业中的应用
• 1.4.1 大豆蛋白在面制品中的应用
• 1.4.2 大豆蛋白在乳制品中和蛋白饮料制品中的应用
• 1.4.3 大豆蛋白在肉类制品中的应用
• 1.5 国内外研究现状
• 1.6 研究的目的和意义
• 1.7 研究目标和研究内容
• 1.7.1 课题研究目标
• 1.7.2 课题研究内容
• 第二章 食品中大豆蛋白含量的 SDS-PAGE 检测方法的建立
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 主要实验原料与试剂
• 2.2.2 主要实验仪器和设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 原料组分的测定
• 2.3.2 大豆分离蛋白提取条件的选择
• 2.3.3 SDS-PAGE 凝胶电泳凝胶浓度的选择
• 2.3.4 SDS-PAGE 凝胶电泳上样量的选择
• 2.3.5 SDS-PAGE 凝胶电泳电压的选择
• 2.3.6 SDS-PAGE 凝胶电泳测定蛋白质的方法
• 2.3.7 SDS-PAGE 凝胶电泳对蛋白质亚基的分析
• 2.3.8 SDS-PAGE 凝胶电泳定量不同样品中的大豆分离蛋白含量
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 大豆分离蛋白提取条件的选择
• 2.4.1.1 肉制品中大豆分离蛋白的提取
• 2.4.1.2 面粉中大豆分离蛋白的提取
• 2.4.1.3 牛奶中大豆分离蛋白的提取
• 2.4.2 SDS-PAGE 检测面条中大豆分离蛋白的含量
• 2.4.2.1 不同电压对电泳结果的影响
• 2.4.2.2 不同分离胶浓度对电泳结果的影响
• 2.4.2.3 不同上样量对电泳效果的影响
• 2.4.2.4 对面粉蛋白和大豆分离蛋白的定性分析
• 2.4.2.5 标准曲线的建立
• 2.4.2.6 方法精密度实验
• 2.4.2.7 加样回收实验
• 2.4.3 SDS-PAGE 检测牛奶中大豆分离蛋白的含量
• 2.4.3.1 牛奶脂肪对 SDS-PAGE 凝胶电泳图谱的影响
• 2.4.3.2 不同分离胶浓度对电泳结果的影响
• 2.4.3.3 不同电压对电泳结果的影响
• 2.4.3.4 不同上样量对电泳结果的影响
• 2.4.3.5 不同脱色温度对电泳结果的影响
• 2.4.3.6 对牛奶蛋白和大豆分离蛋白的定性分析
• 2.4.3.7 标准曲线的建立
• 2.4.3.8 方法精密度实验
• 2.4.3.9 加标回收实验
• 2.4.4 SDS-PAGE 法检测火腿肠中大豆分离蛋白的含量
• 2.4.4.1 分离胶浓度的选择
• 2.4.4.2 SDS-PAGE 上样量对电泳结果的影响
• 2.4.4.3 电压对电泳结果的影响
• 2.4.4.4 SDS-PAGE分离肉蛋白和大豆分离蛋白的分析
• 2.4.4.5 标准曲线的建立
• 2.4.4.6 方法精密度实验
• 2.4.4.7 回收率实验
• 2.4.4.8 商业样品的测定
• 2.4.5 小结
• 2.5 结论
• 第三章 食品中大豆蛋白含量的 HPLC 检测方法的建立
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 主要实验原料与试剂
• 3.2.2 主要实验仪器与设备
• 3.2.3 实验方法
• 3.2.3.1 原料组分的测定
• 3.2.3.2 样品的准备
• 3.2.3.3 样品中蛋白质的提取
• 3.2.3.4 提取溶剂的选择
• 3.2.3.5 色谱条件的选择
• 3.2.3.6 离子对试剂的选择
• 3.2.3.7 检测波长及柱温的选择
• 3.2.3.8 精密度实验
• 3.2.3.9 重现性实验
• 3.2.3.10 稳定性实验
• 3.2.3.11 回收率实验
• 3.2.3.12 HPLC分析和标准曲线的建立
• 3.2.3.13 实际样品测定
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 HPLC 检测面制品中大豆分离蛋白的含量
• 3.3.1.1 提取溶剂的选择
• 3.3.1.2 离子对试剂的选择
• 3.3.1.3 检测波长的选择
• 3.3.1.4 柱温的选择
• 3.3.1.5 HPLC 分离面制品中的大豆分离蛋白
• 3.3.1.6 标准曲线的绘制
• 3.3.1.7 精密度实验
• 3.3.1.8 稳定性实验
• 3.3.1.9 重现性实验
• 3.3.1.10 回收率实验
• 3.3.1.11 小结
• 3.3.2 HPLC 检测纯牛奶中大豆分离蛋白的含量
• 3.3.2.1 提取溶剂的选择
• 3.3.2.2 柱温的选择
• 3.3.2.3 流动相的选择
• 3.3.2.4 HPLC 分离牛奶中的大豆分离蛋白
• 3.3.2.5 标准曲线的绘制
• 3.3.3.6 精密度实验
• 3.3.2.7 稳定性实验
• 3.3.2.8 重现性实验
• 3.3.2.9 加标回收实验
• 3.3.2.10 小结
• 3.3.3 HPLC 检测肉制品中大豆分离蛋白的含量
• 3.3.3.1 提取溶剂的选择
• 3.3.3.2 流动相的选择
• 3.3.3.3 HPLC 分离肉制品中的大豆分离蛋白分析
• 3.3.3.4 标准曲线的绘制
• 3.3.3.5 精密度实验
• 3.3.3.6 稳定性实验
• 3.3.3.7 重现性实验
• 3.3.3.8 回收率实验
• 3.3.3.9 样品测定
• 3.3.3.10 小结
• 3.4 两种方法的分析比较
• 第四章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历