大鼠脂肪间充质干细胞复合胶原/透明质酸支架成软骨分化的实验研究

论文摘要

关节软骨损伤后有限的自身修复能力及其对人体功能的严重影响，使其成为骨科基础和临床研究中的热点和难点课题，目前尚未得到很好的解决。传统的治疗如微骨折、磨削成形术、骨膜软骨膜移植、骨软骨移植、人工关节置换等均存在一定的不足。近年来组织工程的发展有望成为治疗软骨损伤的新方法。组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理，对病损组织结构和功能的修复与重建进行研究开发的一门新兴学科。与胚胎干细胞、基因工程一起被认为是生命科学发展史上的又一个里程碑，标志着人类将走出单纯器官移植领域，步入组织、器官再造的新领域。但目前组织工程软骨应用急需解决的问题有：①具有较强增殖能力和多分化潜能的细胞；②合适的细胞载体；基于以上要求，本实验进行了以下三部分实验的研究。 第一章 大鼠脂肪间充质干细胞分离、培养及生物学特性的实验研究 目的 掌握大鼠脂肪间充质干细胞的分离、培养和扩增的方法，并探讨其部分生物学特性。方法 无菌技术下切取大鼠双侧腹股沟脂肪垫，加入适量Ⅰ型胶原酶消化获取细胞，接种入含10％新生牛血清的DMEM培养液，倒置显微镜下连续观察细胞形态变化。取传代细胞用流式细胞仪和免疫细胞化学检测表面抗原标志CD29、CD34、CD44。MTT法测定第2、5、10代细胞的生长曲线。并测定细胞的贴壁率。结果 原代培养显示原代细胞3天左右开始贴壁，呈梭形成纤维样细胞形态，8天左右可达90％融合，呈旋涡状排列，形成集落。传代后2～4小时开始贴壁，经过较短的潜伏期后开始增殖，3d即可长满。10代以后细胞传代后潜伏期延长，细胞增殖速度逐渐减慢。免疫细胞化学检测显示细胞表达MSCs表面抗原标志CD44、CD29，而不表达造血干细胞表面标志CD34。流式细胞仪检测结果有95％的细胞表达CD44，96％的细胞表达CD29，而只有5％的细胞表达CD34。生长曲线显示第2、5代大鼠ADMSCs细胞增殖能力较强，以第5代细胞为甚，第10代细胞增殖能力减弱。2、6、12h贴壁率分别为33％、75％、90％。结论 从大鼠脂肪中分离的细胞具有间充质干细胞的特性，能长期培养，生长稳定、增殖较快，可以作为组织工程的种子细胞。 第二章 大鼠脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化的实验研究

论文目录

• 英文缩略词
• 前言
• 第一章 大鼠脂肪间充质干细胞分离、培养及生物学特性的实验研究
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 结论
• 第二章 大鼠脂肪间充质干细胞成软骨诱导分化的实验研究
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 第三章 大鼠脂肪间充质干细胞复合胶原/透明质酸支架成软骨分化的实验研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 结论
• 参考文献
• 综述一 关节软骨损伤治疗的研究进展
• 综述二 组织工程修复关节软骨损伤的研究进展
• 致谢
• 攻读学位期间主要成果