NK细胞活化性受体配体在结肠癌细胞的表达与NK细胞杀伤敏感性的关系

论文摘要

目的:1.研究NK细胞活化性受体配体CD155、CD112及MICA/B在结肠癌细胞系的表达情况,并尝试联合应用不同细胞因子上调相关配体表达。2.观察新鲜结肠癌组织中CD155、CD112及MICA/B的表达情况。3. NK细胞杀伤结肠癌细胞实验。4. NK细胞杀伤结肠癌细胞机制研究。方法:1.结肠癌细胞系Colo205、SW116及SW480培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,EDTA常规传代,取对数生长期细胞进行活细胞免疫荧光染色,FCM检测CD155、CD112及MICA/B的表达情况。2.取手术切除的新鲜结肠癌组织,OCT包埋,液氮冻存,-20℃切片,应用免疫组化法检测新鲜结肠癌组织CD155、CD112及MICA/B的表达情况。3. NK92细胞培养于含12.5%胎牛血清及12.5%马血清的αDMEM培养基中。将NK92细胞作为效应细胞,三种结肠癌细胞系作为靶细胞,按照效靶比5:1调整细胞浓度后,采用CFSE法检测NK细胞的杀伤水平。4. NK细胞杀伤结肠癌细胞的机制研究。取生长状态良好的对数生长期NK92细胞以及三种结肠癌细胞进行实验,实验分为:NK细胞组（未经任何诱导活化）、NK细胞+Colo205组、NK细胞+SW116组、NK细胞+SW480组,在各组中自实验开始即加入CD107a-PE-Cy5单抗,以及同型无关IgG1-PE-Cy5对照单抗,在37℃,5%CO2环境下孵育6小时,充分洗涤2次后固定待检,对比观察未经诱导的NK细胞与经过不同细胞系诱导活化后的NK细胞脱颗粒情况之间的差异。结果:1. CD155在Colo205、SW116和SW480三种结肠癌细胞系的表达分别为:79.3%、95.1%及92.7% ;CD112在Colo205、SW116和SW480三种结肠癌细胞系的表达分别为:99.3%、98.7%及47.1% ;MICA/B在Colo205、SW116和SW480三种结肠癌细胞系的表达分别为:4.8%、29.7%及85.5%。2.共检测12例新鲜结肠癌组织,CD155阳性表达6例（50%）其中强阳性3例（25%）;CD112阳性表达5例（41.7%）其中强阳性1例（8.3%）;MICA/B阳性表达3例（25%）,其中强阳性1例（8.3%）。3. CFSE法测得NK92细胞对Colo205、SW116和SW480三种细胞系的杀伤比率分别为:54.6%、52.6%、47.1%。4. NK细胞组CD107a表达率为41%;NK细胞+Colo205组CD107a表达率为68.4%;NK细胞+SW116组CD107a表达率为93.5%;NK细胞+SW480组CD107a表达率为97.1%。结论:1.NK细胞活化性受体配体CD155、CD112及MICA/B在三种结肠癌细胞系的表达率较高,其中CD226的配体CD155/CD112在结肠癌细胞的表达率较NKG2D的配体MICA/B显著高。2.新鲜分离的结肠癌细胞中,均查见三种配体的表达,与细胞实验的结果基本一致,其中CD155/CD112在结肠癌细胞的表达率较MICA/B显著高。3.CFSE法测得NK92细胞对三种结肠癌细胞的杀伤率较高,提示了NK细胞可能是通过其膜表面活化性受体CD226及NKG2D与相应受体结合后活化,从而发挥杀伤结肠癌细胞的作用。4.NK细胞在杀伤结肠癌细胞时,其CD107a的表达率明显升高,提示NK细胞可能主要是通过释放穿孔素/颗粒酶途径杀伤结肠癌细胞的。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 第一部分
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 第二部分
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢