白芷提取液对内皮素ET介导的人黑素细胞黑色素合成的影响

论文摘要

[目的]人体皮肤在防御不利的物理化学因素方面起重要作用。人表皮黑素细胞重要的功能是合成和运输黑色素，黑色素合成和运输过程是受各种因素影响的复杂代谢过程。黑素细胞中存在与黑色素合成相关的酶如酪氨酸酶，酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）和酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）；内皮素1（ET1）是角质形成细胞分泌的一种生理活性因子，由21个氨基酸组成。内皮素1（ET1）可以增加黑素细胞树突状突起、促进黑色素合成。内皮素1与黑素细胞内皮素受体（ETBR）结合，可以激活级联信号转导通路，引起胞内钙离子和cAMP浓度升高，蛋白激酶C （Protein Kinase C, PKC）激活，MAPK（mitogen-activated protein kinase）活化；这些胞内事件将导致黑素细胞TYR转录增加，酶活性改变以及细胞增殖。临床实践表明，某些中药具有调节黑素细胞代谢的作用，但相关作用机制尚未阐明。为了探索中药是否可能通过调节黑素细胞内皮素受体（ETBR）的表达，从而影响黑素细胞的代谢，本研究采用体外培养正常人黑素细胞为细胞模型，应用白芷提取物作用于ET1介导的黑素细胞并检测其对黑色素合成相关代谢的影响。[方法]体外分离和纯化培养正常人黑素细胞，醇提法提取中药白芷的活性成分，观察白芷提取物对ET1介导的正常人黑素细胞的细胞增殖，酪氨酸酶活性，黑色素生成方面的调节作用，并通过RT-PCR半定量测定白芷提取物对ET1介导的黑素细胞相关酶TYR mRNA表达的影响，利用细胞免疫荧光检测方法观察白芷提取物对于内皮素1介导的黑素细胞ETBR表达的变化。[结果]1本研究成功分离及纯化了人黑素细胞，完善了人表皮黑素细胞体外培养条件。2白芷提取液对内皮素1诱导的黑素细胞的增殖有一定的抑制作用；对黑素细胞酪氨酸酶活性有一定的抑制作用；可以降低黑素细胞中的黑色素合成量。尤其是25μg/ml的白芷提取物抑制作用最为明显。白芷提取液可以通过调节黑素细胞的增殖，抑制酪氨酸酶活性、减少黑色素的合成量，从而调节体外培养人表皮黑素细胞的色素代谢。3细胞免疫荧光检测结果显示25μg/ml白芷提取液对10nM的内皮素1诱导的黑素细胞受体（ETBR）的表达具有抑制作用。[结论]1成功模仿建立了体外原代培养的人表皮黑素细胞模型2一定浓度的白芷提取液对内皮素1诱导的黑素细胞的增殖有抑制作用；对黑素细胞的酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用；可以降低内皮素1诱导的黑色素的合成量。3白芷提取液可以从基因水平上降低ET1介导的酪氨酸酶基因mRNA的转录。4 25μg/ml白芷提取液可以下调内皮素1诱导的黑素细胞内皮素受体（ETBR）的表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第1章 前言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 第3章 实验结果
• 3.1 白芷有效成分的提取
• 3.2 人黑素细胞的体外纯化培养和鉴定
• 3.3 白芷提取液对 ET1 介导的黑素细胞形态的影响
• 3.4 白芷提取液对内皮素1 体外培养人黑素细胞增殖的影响
• 3.5 白芷提取液对内皮素1 介导的黑素细胞酪氨酸酶活性的影响
• 3.6 白芷提取液对内皮素1 介导的黑素细胞黑色素合成的影响
• 3.7 白芷提取液对人黑素细胞内皮素1 受体（ETBR ）表达的影响
• 3.8 白芷提取液对ET诱1导的黑素细胞TYR、β -a c t i mnRNA表达的影响
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 附录1
• 附录2
• 个人简历
• 研究生期间发表论文
• 综述
• 参考文献
• 致谢