论文摘要
背景：帕金森疾病（Pakinson’s Disease,PD）是继阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）后第二大常见的、缓慢发生的、与年龄相关的神经退行性疾病,又名震颤麻痹。在工业化国家,PD患者占总人口的0.3%,占60岁以上人口的1%,而全球每年每100,000人中新增8-18例PD患者。目前除了SPECT或者PET影像方法辅助外,帕金森病统一评分量表（Unified Pakinson’s Disease Rating Scale,UPDRS）和改良的Hoehn和Yahr帕金森病分期量表（H-Y分期）是PDI临床诊断和治疗评估的常用方法。根据英国脑库的帕金森病诊断标准,患者有少动,再加上静止性震颤、肌强直、姿势步态异常三种症状中的一种,即可诊断为PD。由于PD患者很难进行脑部组织的活检,当出现上述较明显的临床表现时,患者多巴胺能神经元已变性缺失50%-70%,这会延误早期治疗。因此,迫切地需要和发展能早期诊断PD的无侵入性和创伤性的生物标志物。微小核糖核酸（microRNA）是一类长度为19-23个核苷酸的非编码RNA,研究发现在人血清中稳定存在各种：niRNAs,而且肿瘤患者血清/血浆中miRNA的表达谱呈现特定的变化,这些特异性变化的miRNA表达谱开启了无创性的肿瘤早期诊断和预后判断的新思路。我们推测PD患者血清中可能也存在一些特异性变化的miRNA并且有助于PD的早期判断。本实验研究的目的是筛选出PD患者血清特异miRNA表达谱,并评价其对PD诊断的价值。方法：收集了106例散发性PD患者血清和115例年龄/性别匹配的健康人血清。首先运用Solexa测序技术检测了15例PD患者和15例健康人组成的两份混合血清中1223种miRNAs的表达量,初步筛选出PD组与control组相比显著差异表达的miRNAs。然后运用实时荧光定量PCR技术（quantitive realtime PCR,qRT-PCR）分两步验证初筛的miRNAs。通过复筛组（45例PD和36例control）,验证组（61例PD和79例control）的验证,以获得在PD患者中显著差异表达的一组血清miRNAs。最后通过聚类分析和ROC曲线等评价其临床诊断价值。结果：Solexa测序发现,PD组和control组混合血清分别能够检测到159种和138种miRNAs,初筛了15种miRNA进一步验证。运用qRT-PCR技术对复筛组检测后发现有5种miRNA （miR-195, miR-185, miR-15b, miR-221, miR-181a）在患者血清中的表达与健康人血清有显著差异；验证组进一步证实了复筛组结果。5种miRNA的ROC曲线下面积分别为]miR-195（AUC=0.65,95%CI=0.57-0.79）, miR-185 （AUC=0.80,95%CI=0.74-0.86）, miR-221 （AUC=0.81,95%CI=0.75-0.86）, miR-15b （AUC=0.83,95%CI=0.77-0.89）, miR-181a （AUC=0.74,95%CI=0.67-0.80）。根据临床cut off值,计算了5种血清miRNA的灵敏性和特异性,分别是：miR-195为50%和69%,miR-185为60%和77%,miR-221为64%和81%,miR-15b为66%和82%,miR-181a为50%和77%。聚类分析结果显示复筛组中41例PD患者和32例健康人能够被正确分开,正确划分率为91.1%和88.9%,而验证组中52例PD患者和39例健康人能够被正确分开,正确划分率为85.2%和49.4%。结论：PD患者和健康人血清中存在丰富而稳定的各种miRNAs,患者血清miRNA表达谱与正常人具有显著差异；我们发现PD患者血清中miR-195显著上调,而miR-185, miR-15b, miR-221, miR-181a显著下调；这5种miRNAs的组合能够作为潜在的血清标志物进行PD诊断。