论文摘要
树突状细胞是目前已知的机体内功能最强的专职抗原提呈细胞,它能有效地刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化,同时也对维持机体的免疫耐受和调节免疫应答起到关键性的作用。雌激素在自身免疫性疾病的性别偏好中发挥重要作用,树突状细胞也参与自身免疫性疾病的发生和发展。已有研究报道,雌激素可调节树突状细胞的成熟、功能和细胞因子的分泌水平,但其作用机制不清。因此,阐明雌激素调控树突状细胞的分子机制对于深入理解自身免疫性疾病的性别偏好至关重要。基于我们前期研究发现MCM分子参与免疫细胞功能的调节。本研究主要探讨雌激素调控树突状细胞的具体信号机制,并结合临床样本考察MCM6分子在典型的自身免疫病-系统性红斑狼疮患者中的变化,试图揭示自身免疫病性别倾向的机制。为此,首先我们通过RT-PCR、免疫印迹以及流式细胞技术等方法证明了雌二醇可以影响树突状细胞表面标志CD40、CD80、CD86以及MHCⅡ的表达上调,并且雌二醇对MCM家族分子中MCM6调节作用中最为明显。紧接着,我们通过信号通路研究相关手段探讨了雌二醇在这些调节作用中的具体信号通路,发现雌二醇通过p38以及JNK通路而影响CD40以及MCM6的表达水平。那么,CD40和MCM6之间是否存在一定联系呢?为此,我们建立了MCM6的干扰系统,并且发现干扰MCM6的表达之后,雌二醇引起的CD40的表达上调也被抑制了。那么,MCM6在雌二醇调节树突状细胞的功能中,除了影响CD40的表达之外,还起到什么作用呢?我们在干扰了MCM6的表达之后,利用cck-8检测了树突状细胞的活力,利用PI & Annexin V检测了细胞的凋亡水平,利用FITC-dextran检测了细胞的吞噬能力,利用3H掺入法检测了细胞的增殖能力,利用MLR检测了树突状细胞活化T细胞的能力,利用ELSIA检测了细胞因子的分泌水平,结果发现MCM的低表达只影响树突状细胞对T细胞的活化能力。然后,我们又收集了一系列临床样本,通过Q-PCR验证了在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞以及树突状细胞中MCM6的表达水平要明显高于正常人,且MCM6的表达水平与雌二醇水平呈正相关。最后,我们通过化学基因策略构建了MCM6上游激酶JNK的突变型质粒,并通过免疫印迹、激酶实验等方法验证了其功能,证明该质粒在正常情况下具有野生型JNK的活性,但是在ATP类似物存在下可以特异性地抑制其活性,并且起效时间短,作用时间长,因此,该质粒可以作为进一步深化研究MCM6在免疫细胞细胞周期中功能的有力工具。综上所述,本研究发现：①雌激素通过激活p38和JNK信号通路而上调树突状细胞表面共刺激分子CD40的表达,从而增强树突状细胞的免疫功能,而这一过程是依赖于MCM6分子的表达的。②通过临床样本的分析,证明了在SLE患者中外周血单个核细胞以及树突状细胞中,MCM6的表达水平均高于正常人,并且SLE患者MCM6表达水平与其血清中雌激素水平呈正相关。③通过化学基因策略构建了MCM6上游激酶JNK的突变型质粒,这种质粒具有完全可控性。本研究首次发现了MCM6在雌激素调控树突状细胞中的功能并探讨了其具体机制,并且结合临床揭示了MCM6在系统性红斑狼疮中的重要作用,为解释自身免疫病的性别倾向提供了重要的理论依据。已构建的MCM6上游激酶JNK突变型质粒可望作为一种良好工具用于深化研究MCM6在免疫细胞细胞周期中的特殊作用。
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标签：雌二醇论文; 树突状细胞论文; 系统性红斑狼疮论文; 微染色体维持蛋白论文;