草地早熟禾转录因子基因PpNAC的克隆和表达分析

论文摘要

草地早熟禾（Poa pratensis L.）是禾本科早熟禾属植物,广泛分布于北温带冷凉湿润地区,是一种多年生冷季型禾草,其叶形美观,具匍匐根状茎,既是一种牧草,也是一种优良的草坪草。草地早熟禾喜冷凉湿润的气候,耐寒性较强,但不耐干旱,尤在高温高湿条件下易感病。NAC蛋白是植物特有的一类转录因子,在植物的生长发育、器官建成、激素调节和防御抵抗多种生物和非生物胁迫等方面发挥着重要作用。因此,本文采用RACE技术从草地早熟禾中克隆NAC类转录因子基因,并对其功能进行了研究。主要结果如下:（1）以200mM NaCl处理的草地早熟禾叶片为材料制备cDNA,采用RACE技术克隆得到1个NAC基因,其片段总长分别为1147bp,包括完整开放阅读框837bp,预测编码长度为278个氨基酸的多肽链,分子量31.43 kD。核苷酸序列比对结果表明该基因编码的蛋白属于NAC转录因子家族,命名为PpNAC。（2）构建了pBI-PpNAC-GFP荧光表达载体,并转化洋葱鳞茎表皮细胞,瞬时表达结果显示,PpNAC主要定位于细胞核。（3）以DIG标记的PpNAC cDNA作为探针,进行Southern Blot,证明PpNAC在草地早熟禾基因组中只有一个拷贝。（4）以eEF-1α作为内参,对不同逆境条件下,草地早熟禾PpNAC的表达进行Real-time PCR检测。结果表明,PpNAC的表达显著受到4℃低温、37℃高温、NaCl、ABA、SA的促进,而受到PEG、MeJA和ET的抑制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.1.1 研究背景
• 1.1.2 研究目的意义
• 1.1.3 项目及经费支持
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 植物对非生物逆境的生理响应
• 1.2.2 植物响应非生物逆境的信号转导途径
• 1.2.3 植物NAC 转录因子在抵御非生物逆境中的作用
• 1.3 研究目标及主要研究内容
• 1.3.1 研究目标及关键问题
• 1.3.2 主要研究内容
• 1.4 研究技术路线
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 试剂及仪器
• 2.2.1 试剂
• 2.2.2 仪器
• 2.3 方法
• 2.3.1 PpNAC 的克隆
• 2.3.2 PpNAC 的生物信息学分析
• 2.3.3 PpNAC 的亚细胞定位分析
• 2.3.4 PpNAC 的拷贝数分析
• 2.3.5 PpNAC 在胁迫下的表达分析
• 第三章 结果与分析
• 3.1 PpNAC 的克隆与序列分析
• 3.2 PpNAC 的拷贝数分析
• 3.3 PpNAC 的亚细胞定位分析
• 3.4 PpNAC 在胁迫下的表达分析
• 3.4.1 逆境胁迫下PpNAC 在草地早熟禾中的表达
• 3.4.2 激素处理下PpNAC 在草地早熟禾中的表达
• 第四章 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.2 讨论
• 4.2.1 PpNAC 的克隆及序列分析
• 4.2.2 PpNAC 亚细胞定位对其功能的影响
• 4.2.3 不同处理条件对PpNAC 表达的影响
• 4.3 展望
• 参考文献
• 在读期间的学术研究
• 致谢
• 摘要
• Abstract