乳腺浸润性导管癌二维电泳实验条件的优化及其差异蛋白质组学分析

论文摘要

乳腺癌在全世界大多数地区的发病率有逐年增高的趋势,现在已经成为女性发病率最高的恶性肿瘤。为了更加全面和深入地了解乳腺癌发生发展和转移的机制,防止乳腺肿瘤的复发和转移,提高患者生存率,本文利用差异蛋白质组学方法详细研究了五例乳腺浸润性导管癌Ⅱ期病人组织样品,并对乳腺组织全蛋白2-DE的多个步骤进行了优化,克服了个体差异的影响,发现了三个共同差异点。经质谱鉴定,这三个蛋白质可能是:免疫球蛋白λ链可变区、胶原蛋白Ⅵα-3链前体和S100A11钙结合蛋白。据文献调研结果,这三种蛋白质的表达失调可能与癌症的发生发展相关。本研究结果为乳腺癌的发病学、防治研究以及预后判断提供了新的研究线索,开辟了新的思路。

论文目录

• 内容提要
• 第一章 前言
• 第一节 乳腺癌的生物学研究
• （一） 乳腺癌的流行病学发病原因
• （二） 乳腺癌的组织学分类及常规诊断方法
• （三） 乳腺癌诊断标志物的基因水平研究
• 第二节 蛋白质组学技术及其应用现状
• （一） 蛋白质组学及其内容
• （二） 蛋白质组学主要技术
• 第三节 肿瘤蛋白质组学的应用和研究现状
• 第四节 乳腺癌的蛋白质组学研究
• （一） 乳腺癌蛋白质组学研究进展
• （二） 乳腺癌蛋白质组学的研究意义
• 第五节 本研究的立题目的与意义
• 第二章 材料和方法
• 第一节 实验材料和仪器
• （一） 乳腺组织样品
• （二） 主要试剂与溶液
• 1. 主要试剂
• 2. 主要仪器设备
• 第二节 实验方法
• （一） 样品制备
• 1. 乳腺癌组织样品的收集、制备前处理、组织样品保存
• 2. 乳腺癌旁组织及实体瘤组织的全蛋白提取方法
• 3. 全蛋白的浓度测定
• 4. 蛋白质电泳上样量标准
• （二） 凝胶电泳操作步骤
• 1. 垂直板SDS-PAGE
• 2. 双向凝胶电泳
• （三） 双向凝胶电泳图像扫描
• （四） 双向凝胶电泳ImageMaster 2D 图像软件分析
• 1. 创建工作区（workspace）
• 2. 蛋白点检定
• 3. 蛋白点配对
• 4. 成对和蛋白点群的报告
• （五） 双向凝胶电泳结果分析
• （六） 质谱鉴定差异蛋白质点
• 1. 质谱样品制备
• 2. 肽混合物的PMF 分析
• 3. 胰酶解肽段混合物的MALDI-TOF-TOF MS 检测
• 4. 数据库查询
• 第三章 实验结果
• （一） 组织材料来源病人情况及其病理报告结果
• （二） 样品制备方法的比较结果
• 1. 蛋白裂解液的比较结果
• 2. 沉淀方法的比较结果
• （三） 建立并优化双向凝胶电泳实验条件
• （四） 癌旁正常乳腺组织和实体瘤组织全蛋白的双向凝胶电泳图谱结果
• （五） 双向凝胶电泳图像分析结果
• 1. ImageMaster 2D 软件对2-DE 凝胶图谱的分析结果
• 2. 癌旁正常乳腺组织与乳腺癌实体瘤组织全蛋白2-DE 凝胶差异点的结果统计
• 3. 凝胶共同差异点的确定
• （六） 双向电泳图谱共同差异点分析
• （七） 制备型凝胶图谱及差异点选取
• （八） 质谱检测结果
• 第四章 讨论
• （一） 样品制备
• 1. 特定病理类型组织样品的选取
• 2. 组织样品的保存
• 3. 组织细胞的破碎
• 4. 样品缓冲液的选择
• 5. 沉淀方法的比较
• （二） 2-DE 参数设置的优化
• 1. 上样量的选择
• 2. 第一向pH 梯度等电聚焦
• （三） 图像软件分析
• （四） 质谱鉴定结果分析
• 第五章 结论
• 参考文献
• 摘要
• Abstract
• 致谢