水飞蓟宾脂质体的研究

论文摘要

水飞蓟宾（Silibinin）为黄酮木质素类化合物,临床用于急性肝炎、慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝、中毒性肝损害（如服用对肝细胞有损害的药物或经常大量饮酒）、保肝。其二偏琥珀酸酯钠为水飞蓟宾的盐类衍生物,有文献报道在体内转化为水飞蓟宾原型而起到治疗作用。本文设计将这两种有效成分共同载入,研制成脂质体剂型,旨在通过尝试各种制备方法制备出包封率高、渗漏率小的脂质体,期望具有肝靶向,更好的发挥对肝脏的药理学作用,主要目的是研究注射安全、稳定性良好、工艺简便的注射用水飞蓟宾冻干脂质体制剂。本文采用高效液相色谱法同时测定水飞蓟宾及其二偏琥珀酸酯钠的药物含量,利用超滤-高效液相色谱法测定两种药物的包封率;考虑到水飞蓟宾的性质和实际的需要,选用乙醇注入法进行制备,通过单因素考察和正交设计试验优化了处方和工艺,制备出较高药物含量和包封率的水飞蓟宾脂质体。对最佳处方工艺制备的脂质体的性质进行评价,包括外观、药物含量、包封率、平均粒径及粒度分布、Zeta电位、与生理盐水注射液配伍的不同配比的pH值、与生理盐水配伍稳定性、渗透压、溶血性等,并且通过考察其药物含量、包封率、pH值以及粒径的变化,对其初步稳定性进行评价。为了提高其稳定性,采用冷冻干燥技术制备了水飞蓟宾冻干脂质体,加水后即可分散成等张的脂质体溶液。通过筛选不同的冻干保护剂及比例,得到冻干保护剂处方,进一步考察冷冻干燥过程的预冻温度、预冻时间、预冻方式以及干燥时间,确定水飞蓟宾冻干脂质体的最佳冻干工艺,并对冻干脂质体再分散后的相关性质进行评价。建立并验证了水飞蓟宾脂质体制剂大鼠体内分析方法,对水飞蓟宾脂质体大鼠尾静脉注射给药的药动学进行了研究,通过药动参数分析比较受试制剂与参比制剂。水飞蓟宾及其二偏琥珀酸酯钠的含量及包封率测定方法符合方法学要求。由单因素考察结果,确定处方为水飞蓟宾的质量浓度为0.3 mg/ml、磷脂的浓度为6 mg/ml、磷脂和胆固醇的质量比为10:1,工艺为类脂溶液的溶解顺序为处方量的磷脂、胆固醇、水飞蓟宾一起溶解在无水乙醇中,溶解温度设定为35℃。采用正交设计试验,确定最佳处方工艺组合为药脂比为1:20,缓冲液pH值为5.70,水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的加入浓度为0.10mg·mL-1,类脂溶液的溶解时间为20 min。最优处方工艺制备的水飞蓟宾脂质体外观呈白色乳状液,主药的含量分别为188μg/mL±8μg/mL、897μg/mL±10μg/mL,包封率分别为89.44%±1.28%、51.46%±0.99%,平均粒径为（160±23）nm,Zeta电位为（-18.6±1.2）mV,与生理盐水注射液配伍的不同配比的pH值约为pH5.79;与生理盐水配伍稳定;渗透压符合注射剂要求,制剂浓度范围内无溶血性等。制备水飞蓟宾脂质体冷冻干燥制剂,确定质量比为1:3的磷脂与甘露醇的单独冻干保护剂,筛选出磷脂与甘露醇、海藻糖的比例为1:1.5:1.5的合用冻干保护剂,并采用直接外加法将冻干保护剂加入脂质体制剂中,确定水飞蓟宾脂质体的最佳冻干工艺为预冻温度为-70℃,预冻时间为5h,选择速冻的预冻方式,干燥时间确定为32h,制剂学性质评价表明,冻干后脂质体的外观及包封率、粒径、pH均没有明显变化,无溶血性。加速试验结果表明冻干脂质体在温度为25℃±2℃、相对湿度为60%±10%的条件下放置一个月比较稳定。药动结果表明,水飞蓟宾脂质体的大鼠药动学参数较注射剂的有显著的变化。综上所述,乙醇注入法制备的水飞蓟宾脂质体,药物包封率高,粒径小,分布均匀,表面荷负电,无溶血性,符合静脉注射要求,其冻干制剂只需通过简单再分散,冻干脂质体即可很容易和很快地被重建形成脂质体混悬液而性质差别不大,提高了稳定性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 脂质体剂型概述
• 1.1 脂质体的定义及其发展
• 1.2 脂质体的作用特点
• 1.3 脂质体稳定性的研究及冷冻干燥技术
• 2 模型药物的简介
• 2.1 水飞蓟宾来源、结构和临床应用
• 2.2 水飞蓟宾的作用机理
• 2.3 水飞蓟宾制剂现状
• 2.4 水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠
• 3 水飞蓟宾脂质体的提出及其研究意义
• 第一章 水飞蓟宾脂质体处方前研究
• 1 仪器与材料
• 2 方法与结果
• 2.1 药物体外分析方法的建立与验证
• 2.1.1 HPLC分析方法的建立
• 2.1.2 HPLC分析方法的验证
• 2.1.3 制剂中药物含量测定方法
• 2.2 水飞蓟宾在不同pH值下溶解度和油水分配系数的考察
• 2.3 水飞蓟宾脂质体包封率测定方法
• 2.3.1 包封率测定方法的确定
• 2.3.2 超滤法测定游离药物含量
• 2.3.3 加样回收率考察
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 水飞蓟宾脂质体处方和工艺的优化研究
• 1 仪器与材料
• 2 方法与结果
• 2.1 水飞蓟宾脂质体的制备
• 2.1.1 制备方法的选择
• 2.1.2 乙醇注入法制备水飞蓟宾脂质体
• 2.2 水飞蓟宾脂质体处方的单因素考察
• 2.2.1 磷脂浓度
• 2.2.2 磷脂和胆固醇的质量比
• 2.2.3 药脂比
• 2.2.4 缓冲液pH值
• 2.3 水飞蓟宾脂质体工艺的单因素考察
• 2.3.1 溶解顺序
• 2.3.2 溶解温度
• 2.3.3 溶解时间
• 2.4 水飞蓟宾二偏琥珀酸酯钠的载入
• 2.5 正交设计优化处方工艺
• 2.6 脂质体处方工艺的确定
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 水飞蓟宾脂质体的性质和初步稳定性研究
• 1 仪器与材料
• 2 方法与结果
• 2.1 水飞蓟宾脂质体性质的考察
• 2.1.1 水飞蓟宾脂质体的外观
• 2.1.2 脂质体中药物含量的测定
• 2.1.3 脂质体中药物包封率的测定
• 2.1.4 平均粒径及粒度分布测定
• 2.1.5 Zeta电位的测定
• 2.1.6 与生理盐水注射液配伍不同配比的pH值变化
• 2.1.7 与生理盐水注射液配伍稳定性考察
• 2.1.8 渗透压的测定
• 2.1.9 溶血性考察
• 2.2 水飞蓟宾脂质体稳定性的初步考察
• 2.2.1 药物含量变化
• 2.2.2 包封率变化
• 2.2.3 pH值变化
• 2.2.4 粒径变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 水飞蓟宾脂质体冻干制剂的研究及制剂学评价
• 1 仪器与材料
• 2 方法和结果
• 2.1 冻干保护剂的筛选
• 2.1.1 冻干保护剂的选择指标
• 2.1.2 保护剂的选择
• 2.1.3 单种保护剂用量的考察
• 2.1.4 冻干保护剂合用的考察
• 2.1.5 冻干保护剂的加入方式
• 2.2 冻干工艺的考察
• 2.2.1 预冻温度的考察
• 2.2.2 预冻速度的考察
• 2.2.3 预冻时间的考察
• 2.2.4 干燥时间的考察
• 2.3 水飞蓟宾冻干脂质体的制剂学评价
• 2.3.1 外观及包封率
• 2.3.2 平均粒径及粒度分布测定
• 2.3.3 pH值的测定
• 2.3.4 溶血性考察
• 2.3.5 加速稳定性考察
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 水飞蓟宾脂质体在大鼠体内的药物动力学研究
• 1 仪器与材料
• 2 方法与结果
• 2.1 大鼠血药分析方法的建立和验证
• 2.1.1 色谱条件
• 2.1.2 血浆样品的处理
• 2.1.3 方法专属性
• 2.1.4 标准曲线的建立
• 2.1.5 方法精密度与准确度
• 2.1.6 最低检测限和最低定量限的确定
• 2.1.7 提取回收率
• 2.2 水飞蓟宾脂质体的大鼠体内药动学研究
• 2.2.1 受试制剂和参比制剂的制备
• 2.2.2 给药方案及血样的采集
• 2.2.3 血药浓度测定结果
• 2.2.4 平均药时曲线
• 2.2.5 实验数据处理
• 3 讨论
• 4 小结
• 全文结论
• 参考文献
• 发表论文
• 致谢