FOXM1在肺癌组织中表达及其分子致癌机制

论文摘要

目的：研究肺癌组织中FOXM1表达与其预后的关系,构建FOXM1报告基因并通过多种方法研究肺癌细胞株中FOXM1表达情况及其作用机制。方法：1.采用PCR法获得目的基因并与空载体连接构建报告基因；2.采用免疫组织化学法检测80例肺癌组织中FOXM1、KI-67的表达水平,并收集病例临床资料,分析FOXM1、KI-67表达水平与生存时间的关系；3.采用免疫荧光法研究吉非替尼对FOXM1的影响；4.采用western blotting、real-time PCR和转染研究细胞中FOXM1表达水平；5.FOXM1报告基因转染细胞,通过检测报告基因荧光强度,研究尼古丁对FOXM1的影响；6.癌基因c-myc、P-catenin、AKT、抑癌基因RasN17、EP300同FOXM1报告基因共转染,研究其对FOXM1表达的影响。结果：1.80例癌组织中,KI-67强阳性率61.25%,弱阳性率26.25%,阴性率12.50%。FOXM1强阳性率66.25%,弱阳性率25.00%,阴性率8.75%。两者呈正相关,相关系数=0.437。非吸烟组中FOXM1低表达者生存时间比高表达者长,x2=4.439, P=0.035。吸烟组中FOXM1低表达者生存时间比高表达者短,x2=4.613,P=0.032;2.转染实验尼古丁组比对照组荧光强；3.real-time PCR、western blotting和转染表明癌细胞中有FOXM1表达；4.PC9/AB2细胞中FOXM1与CCNB1表达比例异常；5.免疫荧光实验吉非替尼组FOXM1荧光强度比对照组弱；6.共转染实验,相对于对照组,FOXM1报告基因与癌基因共转染组荧光强,与抑癌基因共转染组荧光弱。结论：1.FOXM1在肺癌组织及细胞中高表达且与不良预后相关；2.尼古丁、癌基因c-myc、β-catenin、AKT均与细胞中FOXM1表达上调相关；吉非替尼、抑癌基因RasN17、EP300均与FOXM1表达下调相关；3.FOXM1与CCNB1的表达异常可能与PC9/AB2细胞耐药机制有关；

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 质粒
• 2.1.3 主要仪器与耗材
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 主要溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 DH5α感受态大肠杆菌制备
• 2.2.2 FOXM1,ENO1,NUSAP1报告基因构建
• 2.2.3 FOXM1免疫组化与生存分析
• 2.2.4 细胞培养
• 2.2.5 细胞免疫荧光
• 2.2.6 Real-time PCR
• 2.2.7 western blotting
• 2.2.8 FOXM1报告基因转染与共转染
• 2.3 质量控制
• 2.4 数据管理与统计学处理
• 3 结果
• 3.1 报告基因构建
• 3.1.1 电泳鉴定pGL6质粒
• 3.1.2 电泳鉴定FOXM1,ENO1,NUSAP1启动子区PCR扩增产物
• 3.1.3 双酶切、电泳鉴定报告基因
• 3.1.4 报告基因测序与原序列比对
• 3.2 免疫组化与生存分析
• 3.2.1 免疫组化
• 3.2.2 生存分析
• 3.3 免疫荧光
• 3.4 Real-time PCR
• 3.5 Western blotting
• 3.6 FOXM1报告基因转染
• 3.6.1 单纯转染
• 3.6.2 nicotine对FOXM1表达的影响
• 3.6.3 癌基因抑癌基因分别同FOXM1报告基因共转染结果
• 4 讨论
• 4.1 FOXM1在肿瘤发生中的意义及其研究现况
• 4.2 FOXM1报告基因的构建
• 4.3 FOXM1在肺癌临床病人组织切片中的表达及其与KI-67的关系
• 4.4 尼古丁能上调细胞中FOXM1的表达
• 4.5 FOXM1在体外培养的癌细胞株中的表达
• 4.6 吉非替尼能下调细胞中FOXM1的表达
• 4.7 c-myc、β-catenin、AKT、RasN17、EP300与FOXM1的关系
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 参考文献
• 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢