TLR3及HPV16E6变异在宫颈病变中的作用研究

论文摘要

目的探讨TLR3、HPV病毒负荷量在宫颈病变进展过程中的作用；探讨TLR3与HPV感染调节的关系；了解本院检测的HPV16E6基因突变在宫颈病变中的分布特征,探讨HPV16E6基因突变与宫颈病变进展的关系。方法从54例HPV16阳性患者宫颈脱落细胞标本中提取DNA作为模版,设计对应的引物,用PCR方法扩增TLR3和HPV16E6片段,对TLR3和HPV16E6进行半定量检测,HPV16E6的PCR产物被纯化回收后送测序。测序结果和GenBank中的德国标准株比对,分析基因变异情况。x结果1.根据宫颈病变程度分为三组,其中A组（包括慢性宫颈炎14例、CIN I4例）18例、B组（包括CIN II-III12例及宫颈原位癌6例）18例及C组（包括宫颈浸润癌）18例,3组患者年龄之间差异无统计学意义。（p=0.506）。2.各组TLR3的表达：在A组、B组、C组中,TLR3DNA表达量分别为（0.6676±0.0226）、（0.6484±0.0353）和（0.5652±0.0330）,其表达量逐渐减低,差异有统计学意义（p<0.001）；其在A组及B组中的表达明显高于C组,差异均具有统计学意义（p<0.001；p<0.001）；在A组中的表达略高于B组,差异无统计学意义（p=0.066）。3.各组HPV16E6DNA表达情况：在A组、B组及C组中,HPV16E6DNA的含量分别为（0.3771±0.0266）、（0.6600±0.0401）和（0.7393±0.0271）,其含量逐渐增加,差异有统计学意义（p<0.001）；其在B组及C组中表达均高于A组,差异均有统计学意义（p<0.001；p<0.001）；在C组中表达高于B组,差异有统计学意义（p<0.001）。4.在测序成功的53例样本中发现HPV16E6DNA在26例样本中（49.06%）存在4个位点突变,其余27例样本（50.94%）未发现突变,为E6野生型。在3组标本中,热突变点为T178G（D25E）,这种变体与HPV16亚洲型As相同,此点突变在A组中的分布低于在B组和C组中的分布,差异均具有统计学意义（p<0.05；p<0.025）,而在B组和C组中的分布差异无统计学意义（p>0.25）。有2例宫颈癌标本发生T241G（3.77%）。另有2个单例标本点突变是G188T（L30I,1.89%）和G543A（L147R1.89%）。5.3组宫颈病变中TLR3表达水平与HPV16负荷量呈负相关,相关系数r=-0.637,p<0.001。结论：1.TLR3可能在HPV感染的调节过程中发挥重要作用,其可能是机体应答HPV感染的主要免疫机制：TLR3在宫颈病变中表达的异常可能与宫颈细胞由宫颈癌前病变向宫颈癌的进展过程密切相关。2.HPV16负荷量与宫颈病变的进展密切相关,HPV16E6基因突变可能是轻度宫颈病变向重度宫颈病变进展过程中的重要危险因素。3.TLR3可能在HPV16E6表达的调节过程中发挥重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 实验标本
• 1.1.2 实验器材
• 1.1.3 相关试剂及耗材
• 1.1.4 主要液体配制
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 全基因组DNA抽提
• 1.2.2 PCR扩增目的片段
• 1.2.3 琼脂糖凝胶电泳
• 1.2.4 阳性PCR产物胶回收
• 1.2.5 目的条带测序
• 1.2.6 统计学方法
• 结果
• 2.1 各组间患者的年龄比较
• 2.2 各组患者TLR3 DNA表达情况
• 2.3 各组标本HPV16 E6 DNA表达情况
• 2.4 HPV16 E6回收纯化后琼脂糖凝胶电泳
• 2.5 HPV16 E6测序结果
• 2.6 各组宫颈病变中TLR3表达水平与HPV16负荷量的相关性
• 讨论
• 3.1 Toll样受体3
• 3.1.1 TL3结构、定位及其配体
• 3.1.2 TLR3信号转导通路
• 3.1.3 TLR3抗病毒作用
• 3.2 HPV16与宫颈癌的关系
• 3.2.1 HPV16导致宫颈病变的发病机制
• 3.2.1.1 HPV16 E6蛋白与p53蛋白
• 3.2.1.2 HPV16 E6蛋白与PDZ蛋白
• 3.2.1.3 HPV16 E6与端粒酶
• 3.2.2 HPV16持续感染及病毒负荷量与宫颈病变的关系
• 3.2.3 HPV16 E6基因变异在宫颈病变发展中的作用
• 3.3 TLR3在宫颈HPV16感染中的作用
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 人乳头瘤病毒致癌机制研究进展
• 综述参考文献
• 致谢