武汉地区儿童感染呼吸道合胞病毒的分子流行病学研究

论文摘要

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus, RSV）是婴幼儿呼吸道感染最常见的病原体之一,特别是2-6个月的婴儿。RSV感染后常致严重毛细支气管炎和肺炎。呼吸道合胞病毒感染常见于婴幼儿且特别好发于六个月以下的婴幼儿,并表现得更为严重且常有重复感染。呼吸道合胞病毒感染也见于老年人群,甚至各年龄阶段的人群,是相当常见的引起呼吸道感染的病毒病原。该病原的流行常好发于深秋冬及早春季节。本实验从华中科技大学同济医学院附属同济医院、武汉市儿童医院和武汉科技大学汉阳医院等医院收集呼吸道感染儿童病例标本108例,全部进行多重RT-PCR检测和实时荧光定量PCR检测。采用Hep-2细胞作为敏感细胞系,对所采集的108份病例标本中的部分进行病毒分离。为了进一步深入研究武汉地区儿童感染呼吸道合胞病毒的分子流行病学,本实验随机选取了两株RSV实验室分离株进行呼吸道合胞病毒的G蛋白编码基因的克隆和测序,对其进行了遗传进化分析。本实验还初步建立了转染态pEGFP-N1-hRSV的细胞模型,为进一步深入探索RSV G单一病毒蛋白在宿主细胞内的功能和RSV致呼吸道相关疾病的蛋白质组学研究提供了有效的手段和奠定了一定基础。相关实验结果表明,所采集的108例病例标本中,RSV阳性占23例,其中A型RSV16例,B型RSV7例,A型和B型混合感染0例。对两株实验室RSV分离株进行了其G基因的分子流行病学研究,发现两株分离株均属A亚型RSV且具较高的核苷酸序列同源性。本实验成功构建了含RSV G基因的重组质粒转染的Hela细胞模型,为G基因的功能和其蛋白质组学研究提供了有效手段和方法。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 呼吸道合胞病毒概述
• 1.1.1 呼吸道合胞病毒的基因组结构及功能
• 1.1.2 RSV的检测及分型方法
• 1.2 RSV与呼吸道疾病发生的关系
• 1.3 中国RSV致呼吸道疾病的流行状况
• 1.4 RSV疫苗研究进展
• 第二章 材料与方法
• 2.1 主要仪器和试剂
• 2.2 样品收集
• 2.2.1 标本的采集时间及对象
• 2.2.2 标本的采集方法
• 2.2.3 样品的保存及运输
• 2.3 病毒分离
• 2.3.1 标本的处理
• 2.3.2 细胞培养和病毒接种
• 2.4 RSV的核酸检测
• 2.4.1 RSV的多重RT-PCR分型检测
• 2.4.2 RSV的实时荧光定量PCR检测
• 2.5 A亚型RSV G蛋白编码基因的遗传进化分析
• 2.5.1 RSV病毒G蛋白编码基因扩增
• 2.5.2 RSV病毒G蛋白编码基因的序列测定
• 2.5.3 序列数据分析
• 2.6 RSV病毒转染细胞模型的建立
• 2.6.1 含G蛋白编码基因的重组质粒的构建
• 2.6.2 脂质体介导的转染
• 2.6.3 表达与鉴定
• 第三章 结果与分析
• 3.1 RSV的核酸检测
• 3.1.1 RSV的多重RT-PCR检测
• 3.1.2 RSV的荧光定量PCR检测
• 3.2 RSV的分离
• 3.3 RSVG蛋白编码基因的分子流行病学研究
• 3.3.1 RSV G蛋白编码基因的扩增
• 3.3.2 RSV G蛋白编码基因序列测定及数据分析
• 3.4 细胞膜型的构建
• 3.5 总结及分析
• 3.5.1 建立了高效、灵敏的RSV的核酸检测方法
• 3.5.2 建立了RSV病毒分离技术
• 3.5.3 获取武汉地区RSV G基因的分子流行病学的相关调查结果
• 3.5.4 建立了含RSV G基因重组质粒的细胞模型
• 3.5.5 严格的质量控制
• 参考文献
• 硕士期间发表的学术论文
• 致谢