论文摘要
目的:利用糖皮质激素与邻苯二甲酸二丁酯(DBP)联合作用致大鼠尿道下裂,验证转录激活因子3(ATF3)在正常大鼠生殖结节(GT)与不同严重程度尿道下裂大鼠生殖结节中的差异表达,以强调组合因素在尿道下裂病因中的重要性,并探讨ATF3在尿道下裂发生中的作用机制。方法:SD孕鼠80只,随机分为4组,每组20只,在妊娠14～18天(GD14～18)分别给予:A组:大豆油2ml/d灌胃;B组:地塞米松(DXM)0.1mg/(kg·d)皮下注射;C组:DBP700mg/(kg·d)灌胃;D组:地塞米松0.1mg/(kg·d)皮下注射加DBP700mg/(kg·d)灌胃。于GD19将各组半数孕鼠处死剖腹统计仔鼠数、雄性仔鼠出生体重(BW)及肛门生殖器间距离(AGD),取雄性仔鼠生殖结节,运用免疫印迹法和免疫组织化学方法分析ATF3的表达情况,剩余孕鼠自然分娩后,于出生后第70天(PND70)观察统计尿道下裂和隐睾的发生情况。结果:地塞米松单独作用于孕鼠仅表现为后代仔鼠出生体重的下降,但与DBP组合作用却能显著增强DBP的致畸作用,导致后代雄性仔鼠出生体重及肛门生殖器间距离/出生体重(AGD/BW)明显减少,且尿道下裂发生率、严重程度以及隐睾发生率较DBP单因素作用下更为显著,统计显示隐睾在C组和D组的发生率分别为:58%和88%,尿道下裂的在C组和D组的发生率分别为:37%和60%,而尿道下裂严重程度则根据出生后70天(PND70)大鼠外生殖器观察统计。蛋白质组学结果显示,ATF3在A组的蛋白相对表达量为0.351±0.012(n=10),B组为0.336±0.015(n=10),C组为0.603±0.014(n=10),D组为0.851±0.016(n=10),C组或D组与A组,以及C组与D组之间的差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示ATF3主要定位于生殖结节的尿道上皮和侧翼间质,C组和D组免疫组化染色强度明显强于A组,而D组染色强于C组。结论:地塞米松联合DBP进一步增强了DBP的致畸作用,表现为后代雄性仔鼠出生体重及肛门生殖器间距离/出生体重(AGD/BW)明显减少,且尿道下裂发生率、严重程度以及隐睾发生率较DBP单因素作用下更为显著,提示我们尿道下裂的发生是环境中多因素协同作用下的结果;ATF3在对照组与实验组组生殖结节中的表达有明显变化,且随着尿道下裂程度的加重而表达增高,ATF3的高表达影响了生殖结节的发育及尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的机制之一。
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标签：转录激活因子论文; 糖皮质激素论文; 邻苯二甲酸二丁酯论文; 尿道下裂论文; 生殖结节论文;