稀土壳聚糖对鲫鱼非特异性免疫、肌肉品质及肠道微生物区系的影响

论文摘要

本论文研究在日粮中添加稀土壳聚糖螯合盐（rare earth-chitosan chelate, RECC）对鲫鱼（Carassius auratus）非特异性免疫力、躯体生化组成以及肠道微生物的影响。试验分为1个空白对照组和3个试验组。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.08%、0.16%和0.24%的RECC。每组5个重复,每个重复35尾试验鱼,鲫鱼平均初始体重约为7.83g。试验期60天。分别在开始饲喂后第20d、40d和第60d时,测定非特异性免疫指标;在试验结束时（60d）,进行肌肉品质和肠道微生物多样性的研究分析。试验结果表明:1、饲喂20d后,三个RECC组血清溶菌酶、脾脏溶菌酶活性较对照组均有不同程度提高,且0.24%RECC组血清溶菌酶显著高于空白对照组（P<0.05）;三个RECC组血清SOD、脾脏SOD、头肾SOD活性略有升高,但各组差异不显著（P>0.05）;三个RECC组脾脏指数、头肾指数与对照组相比均上升,且0.24%RECC组脾脏指数显著高于对照组（P<0.05）,0.16%RECC组、0.24%RECC组头肾指数也显著高于对照组（P<0.05）。但在第40d、60d时,各组间的溶菌酶活性、SOD活性、免疫器官指数比较接近,差异均不显著（P>0.05）。2、本研究中,三个RECC组鲫鱼肌肉中粗蛋白含量高于空白对照组或接近（P>0.05）;粗脂肪含量均高于空白对照组,其中0.16%RECC组粗脂肪的含量显著高于其空白对照组、0.08%RECC组和0.24%RECC组（P<0.05）。在鲫鱼日粮中添加RECC,可提高或显著提高肌肉中肌苷和肌苷酸的含量,降低肌肉中胆固醇含量。其中0.16%RECC组肌苷含量显著高于空白对照组（P<0.05）,三个RECC组胆固醇含量均较空白对照组有不同程度下降（P>0.05）。3、尝试提取鲫鱼肠道菌群总DNA,为研究鱼类肠道菌群结构提供依据。以鲫鱼肠道内容物为样本,使用PBS多次洗涤,离心样品,沉淀菌体。使用试剂盒法提取肠道菌群总DNA,同时以水作为阴性对照。4组样品的DNA提取物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示:各组样品总DNA25kb左右,每组样品条带明亮、清晰、整齐、无降解现象,提取效果较好;而阴性对照组未出现条带。表明所提取DNA样品溶液清亮,可用于后续试验研究。通过设计的细菌通用引物,以提取得到的细菌总DNA作为模板,对其16S rDNA基因进行PCR扩增,所得PCR扩增产物图谱显示清晰,条带整齐,片段长度为450左右,与预期片段大小一致,且没有非特异条带和引物二聚体。该片段的大小、浓度均符合SSCP检测的要求,可以用于后续分析。4、经过SSCP电泳后,图谱中总共出现39个条带,空白对照组、0.08%RECC组、0.16%RECC组、0.24%RECC组条带数目分别为20、22、26、21。其中条带6、条带12、条带24、条带28、条带29为各处理组的共有条带,但这些共有条带在各组中的灰度大小不一致;并且各组都具有数目不等的特有条带。0.08%RECC组、0.16%RECC组和0.24%RECC组Shannon-Wiener指数（H′）分别为4.19、4.39和4.36,均高于空白对照组（3.65）。空白组和0.08%RECC组、0.08%RECC组和0.24%RECC组βc指数较高,其它各组之间βc指数较低。空白对照组和0.08%RECC组、0.08%RECC组和0.24%RECC组相似性较低,分别为0.43和0.42,相似性指数在0.5以下。而其它各组间相似性指数较大,均大于0.5。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 稀土壳聚糖的研究进展
• 1.2 鱼类免疫系统与非特异性免疫系统
• 1.3 鱼类肠道微生物的研究现状
• 1.4 研究的目的及内容
• 第二章 实验研究
• 实验一 稀土壳聚糖对鲫鱼非特异性免疫力的影响
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果与分析
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 实验二 稀土壳聚糖对鲫鱼肌肉品质的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与分析
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 实验三 鲫鱼肠道微生物总DNA 的提取
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 实验四 稀土壳聚糖对鲫鱼肠道微生物区系的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.2 样品处理与检测
• 4.3 结果与分析
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 第三章 结论与建议
• 3.1 结论
• 3.2 创新点
• 3.3 有待进一步解决的问题
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果