WD患者ATP7B基因突变热点及其与临床表型相关性研究

论文摘要

课题背景:肝豆状核变性（Hepatolenticular degeneration, HLD）又名Wilson病（Wilson’s disease, WD）,是一种常染色体隐性遗传性铜代谢障碍性疾病。临床主要表现为血清铜蓝蛋白减低、肝硬化、进行性加重的锥体外系症状、角膜色素环、精神症状等。WD基因存在高度的遗传异质性,且突变热区和高频突变位点具有区域、种族差异性。目前,关于WD患者基因型和临床表型之间的关系存在很大的争议。本研究采用变性高效液相色谱法（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）技术对WD患者进行基因检测,并探讨基因型和表型之间的关系。目的:采用快速、高效的DHPLC对WD患者进行基因检测,寻找中国人WD患者新的基因突变热区和高频突变位点,为建立可用于临床的快速、简便的基因诊断方法奠定基础;并研究中国人WD患者基因高频突变位点的基因型、基因突变类型与临床表型的关系。方法:1.采用DHPLC检测来自72个不同家系的75例WD患者及其家属样本171例的ATP7B基因,其中包括144例双亲和27例同胞。以200名正常健康人为对照。2.收集上述WD患者的临床资料、基因检测结果,以ATP7B基因的第8、16号外显子Arg778Leu和Ile1148Thr突变作为基因型,以错义突变和非错义突变作为突变类型,将患者的性别、发病年龄、病程、临床分型、首发症状及血清铜和血清铜蓝蛋白检测结果等临床表型作为比较的指标,探讨中国人WD患者高频基因突变位点的基因型与临床表型的关系。结果:1. 75例WD患者ATP7B基因的21个外显子经DHPLC检测出53种不同的峰形图。2.经DNA测序证实,75例WD患者共检出13种多态和38种突变,包括24种错义突变、5种无义突变、3种剪接突变、6种移码突变。并首次报道2种新多态:1839C>T（Ile613Ile）,2922G>A （Trp974Trp）,及10种新突变（200例正常对照未发现相同形式的基因型）: 1875-1876dupAATT, 2120A>G（Gln707Arg）,2121+3A>T,2564C>A（Ser855Tyr） , 2620G>C（Ala874Ser）, 2761A>C （ Ser921Arg ） , 3236G>T（Cys1039Phe）,3244-2A>C, 3446G>A（Gly1149Glu）, 3682A>T（Arg1228stop）。3. 75例WD患者突变总的检出率为90.67%（68/75）,基因突变频率为68.67%（103/150）,Arg778Leu突变的检出率为42.67%（32/75）,染色体突变频率为22.67%（34/150）,Ile1148Thr突变的检出率为18.67%（14/75）,染色体突变频率为9.3%（14/150）,第8、12、16号外显子基因突变总的检出率为48%（72/150）。4. 75例患者中,ATP7B基因突变类型与患者的血清铜和血清铜蓝蛋白检测结果无显著性差异（P>0.05）;无Arg778Leu突变组的血清铜水平低于Arg778Leu杂合突变组,有显著性差异（P=0.012）,无Arg778Leu突变组的血清铜水平低于Arg778Leu纯合突变组,有显著性差异（P=0.021）;Ile1148Thr杂合突变组的血清铜蓝蛋白水平高于无Ile1148Thr突变组,有极显著性差异（F=32.822,P=0.000）。5. 75例患者中,Ile1148Thr、Arg778Leu、ATP7B基因突变类型与患者的性别、发病年龄、病程、临床分型、首发症状等临床表型之间均无显著性差异（P>0.05）。结论:DHPLC是一种可用于临床的快速、简便的基因诊断方法;Ile1148Thr突变是中国人WD患者ATP7B基因另一个高频突变热点;WD患者基因型和临床表型之间的关系非常复杂,仍需进一步研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 WD 基因突变位点的检测
• 1 材料和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要实验试剂
• 1.3 主要实验仪器
• 1.4 软件、数据库
• 1.5 实验方法
• 2 结果
• 2.1 ATP7B 基因各外显子的 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果
• 2.2 ATP7B 基因各外显子的 DHPLC 筛查结果
• 2.3 ATP7B 基因外显子异常色谱峰形图的 DNA 测序结果
• 2.4 75 例 WD 患者基因突变特征
• 2.5 WD 患者家属的筛查结果
• 3 讨论
• 第二部分 WD 患者基因型和临床表型关系的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 纳入研究的指标
• 2 结果
• 2.1 WD 患者的临床一般资料
• 2.2 WD 患者基因型与临床表型的关系
• 2.3 家系中WD 患者的基因型与临床表型关系
• 3 讨论
• 全文小结