p38MAPK信号通路在周期性张应力诱导的成纤维细胞凋亡中的作用

论文摘要

目的：牙周炎是人类最普遍的口腔疾病之一,它不仅是牙列缺损乃至缺失的主要原因,也是某些全身疾病如糖尿病、心血管疾病、妊娠并发症的危险因素。近一百年来,对牙周疾病的研究不断深入,其致病机理仍有诸多未解之谜,以往研究已经证实咬合创伤可参与牙周炎的发生与发展,并直接影响牙周组织的改建与修复。牙周膜成纤维细胞作为牙周膜中的主要感受性细胞和效应性细胞,在适宜的周期性应力作用下,可发生增殖、迁移、分化和凋亡,参与组织的适应性改建。本研究拟在成功构建成纤维细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,采用流式细胞术及RT-PCR等先进检测技术,从分子和基因水平探讨周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡的相关机制,初步阐明P38MAPK信号通路在周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中的作用,明确周期性张应力、细胞凋亡及P38MAPK信号通路三者的关系,为全面诠释咬合创伤的致病机理以及探寻咬合创伤干预治疗的关键靶点提供理论依据和新的思路。方法：以体外培养的成纤维细胞为实验对象,采用多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞施加0h,6h,12h,24h周期性张应力。实验分为加力组（0h,6h,12h,24h）及加力+SB203580组（0h,6h,12h,24h）共八组。细胞所受力值大小以加力板底部硅胶膜的拉伸形变率（%）表示,拉伸形变率越大,表示成纤维细胞所受张应力越大。本实验细胞所受形变率为12%,频率为6循环/分钟,即每循环包括5秒钟牵张和5秒钟松弛。通过流式细胞术分析细胞的凋亡率,RT-PCR检测Bax蛋白的表达情况。加力之前对细胞施加P38MAPK特异性抑制剂SB203580,然后再对细胞施加相同的张应力之后再检测细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达情况。应用SPSS10.0统计软件对实验数据进行统计学分析。结果：1.细胞培养获得了性状稳定的成纤维细胞,并成功构建了成纤维细胞体外培养-力学刺激模型。2.形变率为12%、频率为6循环/分钟的周期性张应力可诱导成纤维细胞的凋亡,成纤维细胞的凋亡率随加力时间的延长而增加,达到最高峰后开始下降,24小时内仍高于未加力组（p<0.05）；阻断p38MAPK信号通路后,凋亡基因bax的表达量降低（p<0.05）。结论：1、成纤维细胞体外培养-力学刺激模型的构建可成功的进行细胞应力加载实验研究。2、形变率为12%、频率为6循环/分钟的周期性张应力可促进体外培养的成纤维细胞的凋亡,其机制可能是通过调控细胞的凋亡基因的活性来实现的。3、P38MAPK信号通路参与调控周期性张应力介导的成纤维细胞凋亡过程。4、周期性张应力介导成纤维细胞凋亡的机制还有其他信号通路的参与,这些通路与P38MAPK信号通路之间可能存在一定的交叉。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 成纤维细胞的体外培养和力学刺激模型的建立
• 1.1. 材料和方法
• 1.2. 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 结论
• 第二部分 周期性张应力对成纤维细胞凋亡的影响
• 2.1. 材料和方法
• 2.2. 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 第三部分 P38MAPK信号通路在周期性张应力诱导的成纤维细胞凋亡中的作用
• 3.1. 材料和方法
• 3.2. 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢