论文摘要
目的：建立一种NSCLC患者外周血CTC的EGFR基因突变检测技术,以使NSCLC患者在EGFR-TKI治疗的获益。方法：首先将H1975细胞株混入抽取的正常人血液内,模拟NSCLC患者外周血。使用免疫磁珠阴性法富集CTC,再使用免疫荧光染色的方法鉴别循环肿瘤细胞,并尝试了FISH法辅助鉴别CTC。比较了包括激光显微切割（LCM）在内的多种单细胞分离技术。对比研究了单细胞和多细胞PCR的扩增阳性率；研究了单细胞全基因组扩增（WGA）与巢式PCR扩增阳性率的关系；并使用测序的方法进行了单细胞EGFR基因突变检测。结果：通过免疫磁珠阴性富集和免疫荧光染色,混入血液内的H1975细胞回收率达到77.2±9.5%；并论证了LCM对本实验的适用性和意义。多细胞PCR的阳性扩增率也仅为50%,不显著优于单细胞PCR。使用WGA不能明显的提高巢式PCR的扩增阳性率,但是对于单细胞的多位点检测有重要的意义。通过本方法的处理,测序法的敏感性即可满足EGFR基因突变的检测要求。结论：本研究所建立的外周血单个CTC的EGFR基因突变检测方法在H1975细胞株上已得到充分的验证,有望于NSCLC患者上取得结果。本方法也可用于其他任何实体瘤的单细胞多基因位点的检测,对于肿瘤学的研究提供了新的研究途径。
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