苦参水提物对动脉再狭窄的抑制作用

论文摘要

研究背景经皮冠状动脉内血管成形术（Percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA）及支架置入术是当前治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病最为有效的重要治疗方法之一,但术后6个月内再狭窄的发生机率高达30%50%,是限制其远期临床效果、增加医疗费用的主要原因。再狭窄的分生机制尚不明确,目前的研究表明再狭窄是局部血管对介入治疗所造成损失的一种修复反应,是由炎性细胞参与、多种细胞因子和生长因子所介导的局部血管重建和再塑;是一系列基因异常表达所引起的血管结构和功能改变。细胞基质分泌、清除失衡、血管中层平滑肌细胞过度迁移、增殖所形成的新生内膜增殖阻塞都起到了重要作用。到目前为止,市场上使用的第一代抗再狭窄的药物是雷帕霉素,以及它的一些衍生物和紫杉醇类。但是现在的治疗方法还存在许多严重的问题,比如:受损的内皮细胞增生和不完全愈合过程（过度的炎症反应和纤维蛋白的沉积）,并且伴随着支架性血栓症,尤其是致命的血栓脱落。苦参是一种常见的中药处方药,而且有多方面的疗效,比如:可以作为抗癌类药物和抗生素类药物,同时也被证明具有很好的抑制免疫反应的作用。最近的一些研究和临床实验表明炎症反应（单核细胞的聚集和激活）的抑制是防治再狭窄的一种很有前途的方法。因此,苦参很有可能在球囊拉伤所造成的再狭窄的治疗中起到重要作用。目的研究苦参能否减弱肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor TNF）的作用以及以此来抑制免疫反应和减少再狭窄程度。从而为应用临床预防和治疗动脉再狭窄提供实验依据。方法实验分成两个部分:第一部分是动物实验,构建动物模型并给药,从病理学方面研究苦参是否抑制动脉再狭窄;第二部分是细胞实验,分析苦参抑制在狭窄的药理学机制。动物实验部分:构建SD-大鼠球囊拉伤模型,将实验动物分成四组（对照组,雷帕霉素组,苦参水提物,模型组）。损伤2周后取其病灶组织,并对病灶区血管进行病理切片,比较分析四个组血管管腔以及管壁结构和功能的变化。细胞实验部分:将实验动物分成四组（对照组,雷帕霉素组,苦参水提物,模型组）。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组化等方法半定量检测血管组织中增值细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen PCNA）、肿瘤坏死因子、TNF蛋白。比较分析苦参对PCNA、TNF和TNF蛋白的表达影响。结果动物实验部分,模型组SD-大鼠血管堵塞,内膜增生,有血栓形成且细胞结构不完整,弹力板断裂。模型很好的模拟了人动脉再狭窄的病理变化,因此模型构建成功。在用药组中,苦参组血管结构完整,血管通畅,内膜出现了一定的增生,但血管还是能完成其运输功能（与雷帕霉素组有相同的病理变化）。雷帕霉素是世界上公认的第一代治疗再狭窄的药物。因而,苦参具有抗再狭窄的功效。细胞实验部分,通过半定量分析法可得出在苦参水提物灌喂组的肿瘤坏死因子的表达相比模型组有显著的下降（当P小于0.01）。雷帕霉素也有显著的抑制肿瘤坏死因子表达的作用且能抑制TNF蛋白的表达。因而,在动脉再狭窄过程中,苦参组和雷帕霉素组（P大于0.05）之间对肿瘤坏死因子的抑制作用的差距不大。苦参组却不能抑制再狭窄过程中PCNA蛋白的表达（与模型组相比,P大于0.05）,而相反的是,雷帕霉素仍然显著地抑制PCNA蛋白的表达。结论在SD大鼠球囊拉伤模型中,苦参水提物对再狭窄的抑制作用,并抑制肿瘤坏死因子的表达,但并不减少增殖细胞核抗原的表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.1.1 再狭窄的定义
• 1.1.2 再狭窄的临床相关因素
• 1.1.3 动脉再狭窄的分类
• 1.1.4 支架内再狭窄的机理
• 1.1.5 动脉再狭窄治疗现状
• 1.1.6 苦参和雷帕霉素的研究前景
• 1.2 立题依据
• 1.2.1 研究瓶颈
• 1.2.2 苦参的研究前景
• 1.3 研究内容
• 1.3.1 苦参对动脉再狭窄的抑制作用（动物实验）
• 1.3.2 苦参抑制动脉再狭窄机理研究（通过抑制TNF 的表达）
• 2 苦参对动脉再狭窄的抑制作用
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 SD—大鼠生理状态
• 2.3.2 SD—大鼠组织病理学检查
• 2.3.3 SD-大鼠病理损伤积分和管腔面积计算（表2.1）
• 2.4 讨论
• 2.4.1 SD-大鼠球囊拉伤模型的建立和评价
• 2.4.2 苦参在心血管疾病上的研究与进展
• 2.4.3 苦参具有很好的抑制再狭窄的作用
• 3 苦参抑制再狭窄机理研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 SD-大鼠动脉平滑肌细胞培养
• 3.3.2 TNF-m RNA 在SD-大鼠动脉平滑肌细胞中的表达
• 3.4 讨论
• 3.4.1 苦参和雷帕霉素治疗前景
• 3.4.2 TNF 与再狭窄之间的关系
• 3.4.3 PCNA 与动脉再狭窄之间的关系
• 3.4.4 实验进展
• 4 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 本研究的创新点
• 4.3 缺陷和不足
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录
• B. 作者在攻读学位期间参与的课题目录