神经生长因子-beta对猪卵母细胞体外发育的影响

论文摘要

神经生长因子与神经细胞生长，存活息息相关。近几年来的研究发现在生殖轴上NGF及其受体也有分布，并且通过差异的表达分布影响着动物的生殖生理；卵丘细胞在卵母细胞的成熟、受精能力和胚胎后期发育中也起着极为重要的作用。本论文中，以NGF与裸卵为主线展开，希望能够发现这两个因子对卵母细胞的影响。1、不同包裹状态的COCs得到的裸卵培养，观察成熟，结果：A级COCs得到的裸卵在成熟率（41.52%）上最高，与C级卵（18.23%）、未分级卵（26.13%）差异显著。2、使用A级卵丘卵母细胞复合体得到的裸卵，体外添加NGF，结果：对成熟和退化没有影响，卵裂率上10ng/mL NGF（50.68%）组最高，与对照组（25.96%）、100ng/mLNGF（29.31%）组差异显著；囊胚率都很低。使用自然裸卵和C级卵形成的Dos重复，得到相同结果结果，但是卵裂率没有达到差异显著，有可能是实验误差和卵母细胞质量本身就低造成的。3、在猪的卵母细胞成熟液添加不同浓度（1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL）的NGF，观察卵母细胞的成熟、退化、卵丘扩散程度，以及孤雌后，孤雌胚胎的发育情况。结果：在成熟率上，添加10ng/mLNGF组的虽然提高了成熟率，但是没有达到差异显著；成熟的卵母细胞在卵丘扩散上表现为100ng/mLNGF组最低并与对照组、10ng/mLNGF组差异显著；在退化率上，10ng/mLNGF组最低，并与100ng/mLNGF组差异显著（16.07%vs23.61%）。孤雌胚胎的发育则表现为：10ng/mLNGF组在卵裂率、囊胚率和囊胚总细胞数上最高，并且与100ng/mLNGF组在卵裂上差异显著（67.95%vs48.41%）,与对照组在囊胚率上差异显著（42.31%vs19.03%）。4、为了更精确探究NGF对COCs的作用时间，我们将成熟时间分为前21小时和后21小时，分别在这两个时间段添加不同浓度的NGF（1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），结果：前21小时添加NGF的各组，对卵母细胞的影响均没有体现；后21小时添加的表现为：10ng/mL NGF组提高了成熟率，降低了退化率，但是没有达到差异显著，卵裂率还是以10ng/mL NGF组（75.72%）最高，并与100ng/mLNGF组（54.32%）表现为差异显著，囊胚率10ng/mL NGF组最高，但差异不显著。5、在猪的胚胎培养液中添加不同浓度（1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL）的NGF，结果：对孤雌胚胎的发育没有影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 试验试剂与溶液
• 1.1.1 试验试剂
• 1.1.2 试验耗材
• 1.1.3 试验仪器
• 1.1.4 试剂配制
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 猪卵母细胞的体外成熟
• 1.2.2 成熟卵母细胞脱卵丘
• 1.2.3 成熟卵母细胞孤雌激活
• 1.2.4 孤雌胚的培养
• 1.2.5 囊胚总细胞染色并计数
• 1.2.6 COCs的分级
• 1.2.7 对不同级别的COCs脱卵丘
• 1.2.8 卵母细胞成熟后退化的评判
• 1.2.9 COCs成熟后，卵丘扩展的评判和分级
• 1.3 试验设计
• 1.4 统计分析
• 2 结果
• 2.1 由不同包裹状态的卵母细胞所形成的猪的Dos，体外培养成熟的观察
• 2.2 NGF对猪Dos体外成熟的影响
• 2.3 NGF对猪COCs体外成熟的影响
• 2.4 NGF在成熟液中半程添加对猪COCs体外成熟的影响
• 2.5 NGF对猪孤雌胚胎的发育的影响
• 3 讨论
• 3.1 由不同包裹状态的卵母细胞所形成的猪的Dos，体外培养成熟的观察
• 3.2 NGF对猪Dos体外成熟的影响
• 3.3 NGF对猪COCs体外成熟的影响
• 3.4 NGF在成熟液中半程添加对猪COCs体外成熟的影响
• 3.5 NGF对猪孤雌胚胎的发育的影响
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历