青蒿琥酯体外抗肿瘤效应及其分子机制研究

论文摘要

目的:研究青蒿琥酯（artesunate,Art）的体外抗癌作用,探讨其分子作用机理,为其进一步的开发利用提供实验依据和理论基础。方法:抗癌活性方面:体外培养人肿瘤细胞,MTT比色法确定青蒿琥酯的抗瘤谱,并分别研究青蒿琥酯与抗癌药5-FU联用,与硫酸亚铁联用的抗癌效果。作用机理方面:采用HOECHST荧光染色法、Annexin V和PI双染流式细胞术研究青蒿琥酯的促凋亡作用、DNA ladder研究肿瘤细胞DNA的变化、ELISA法研究酶caspase-3的活性的改变、免疫组化研究P53、bcl/bax基因的表达;细胞DNA染色流式细胞术研究青蒿琥酯对细胞周期的影响。结果:①青蒿琥酯抗瘤谱较广,对人胃癌7901、肺癌A540、K562、A2780、HEPG-2、KBV200等肿瘤细胞的增殖有明显抑制作用,其IC50值分别为（81.9±4.6）,（78.4±5.1）,（59.1±2.8）,（93.7±4.3）,（75.3±4.1）,（113.3±7.2）μg/ml。②青蒿琥酯对人肝癌系细胞株HEPG-2作用24h,48h,72h的IC50值分别为（103.1±8.6）,（75.3±4.1）,（65.7±6.0）μg/ml。③当青蒿琥酯（10μg/mL、20μg/mL）与5-Fu（2.5μg/mL、5.0μg/mL）联合使用24小时和48小时对HEPG-2细胞抑制率可达到56.7%、67.1%,与5-Fu表现出协同作用。④通过添加硫酸亚铁,并未提高青蒿琥酯对HEPG-2的抑制率（P＞0.05）。⑤荧光染色、流式、DNA ladder结果显示,青蒿琥酯50、100、200μg/mL可以不同程度的诱导HEPG-2细胞凋亡。⑥青蒿琥酯作用HEPG-2细胞48小时后,细胞中caspase-3浓度高于对照组,差别有统计学意义（P＜0.01）;免疫组化结果显示p53,blc-2/bax蛋白的表达发生明显变化（P＜0.05）。⑦细胞周期结果显示,青蒿琥酯处理组与对照组相比,周期分布发生明显变化,将细胞周期阻滞于G2+M期,差别有统计学意义（P＜0.05）。结论:①青蒿琥酯抗瘤谱较广,对多种肿瘤细胞有抑制作用;与传统抗癌药5-FU体外联合使用,具有显著的抗瘤效果;与铁剂联合应用,并未提高青蒿琥酯对HEPG-2的抑制率。②青蒿琥酯可以促进HEPG-2细胞凋亡,其机制可能是通过损伤细胞DNA,激活caspase-3,影响bcl/bax的表达,P53基因介导等途径。③青蒿琥酯影响HEPG-2细胞周期的分布,并将细胞周期阻滞于G2+M期。

论文目录

• 一、论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料
• 主要药品和试剂的配制
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 展望
• 论文参考文献
• 二、综述
• 三、主要英文缩略语表
• 四、致谢
• 五、攻读学位期间发表的学术论文