T细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶TC-PTP在癌组织中表达的研究

论文摘要

T细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（T cell protein tyrosine phosphatase，TC-PTP）在细胞的增殖、分化和转化等生理和病理过程中发挥着重要的调控作用，与人类的疾病有着密不可分的关系。本研究的目的是应用免疫组化方法检测TC-PTP在各种癌组织中的表达情况，为进一步揭示TC-PTP与肿瘤的关系提供理论依据。我们克隆了TC-PTP的催化结构域△TC-PTP基因，构建了表达质粒pT7-△TC-PTP，并进行可溶性表达。表达产物经阳离子交换层析、凝胶层析等技术分离纯化得到△TC-PTP，用其免疫家兔，将免疫后血清通过PVDF膜固定抗原亲和层析柱进行纯化，得到anti-△TC-PTP多克隆抗体，用免疫组化方法，研究了TC-PTP在各种癌组织中的表达情况。结果表明：TC-PTP在肺鳞状细胞癌、肺腺癌、乳腺浸润性导管癌、宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌、胃腺癌、胃印戒细胞癌和直肠腺癌八种癌组织中阳性率为68％～90％，说明TC-PTP在这几种癌组织中有着较为广泛的表达。对癌组织中TC-PTP表达与临床病理特征分析，发现组织分化程度与TC-PTP阳性表达率有关，说明TC-PTP的表达与肿瘤进展和恶性程度呈负相关性，有可能作为判断预后的指标之一。本论文为进一步研究TC-PTP在肿瘤和其它人类疾病中的生物学功能奠定了基础。

论文目录

• 内容提要
• 缩写词表
• 前言
• 1 细胞信号转导概述
• 1.1 蛋白质激酶概述
• 1.2 蛋白质磷酸酶概述
• 2 TC-PTP研究现状
• 2.1 TC-PTP概述
• 2.2 TC-PTP基因调控
• 2.3 TC-PTP在细胞信号转导中的调节作用
• 2.4 TC-PTP与疾病的关系
• 3 相关癌症简介
• 4 本研究的目的与意义
• 实验方案
• 第一部分 TC-PTP催化结构域的克隆、表达及分离纯化
• 1 实验材料
• 1.1 菌种和质粒
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 1.4 培养基和缓冲液
• 2 实验方法
• 2.1 克隆载体的构建
• 2.2 表达载体的构建
• 2.3 △TC-PTP的表达及分离纯化
• 3 实验结果
• 3.1 目的片段的扩增
• 3.2 克隆载体的构建
• 3.3 表达载体的构建
• 3.4 目的蛋白的表达
• 4 讨论
• 5 本章小节
• 第二部分 anti-△TC-PTP多克隆抗体的制备
• 1 实验材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂
• 2 实验方法
• 2.1 用△TC-PTP免疫家兔
• 2.2 ECL法检测免疫前后血清效价
• 2.3 "PVDF膜固定抗原亲和层析柱"纯化多克隆抗体
• 2.4 ECL法检测抗体纯化后的效价
• 2.5 ECL法检测抗体纯化前后的灵敏度
• 2.6 Western Blotting法检测抗体纯化前后的特异性
• 3 实验结果
• 3.1 ECL法检测免疫后血清效价
• 3.2 ECL法检测纯化后抗体效价
• 3.3 ECL法检测纯化前后抗体的抗体灵敏度
• 3.4 Western Blotting法检测抗体纯化前后的特异性
• 4 讨论
• 5 本章小节
• 第三部分 TC-PTP在癌组织中表达情况的检测
• 1 实验材料
• 1.1 组织
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 组织石蜡切片的制备
• 2.2 免疫组化检测
• 2.3 免疫组化结果判定
• 3 实验结果
• 3.1 显微镜检测免疫组化切片
• 3.2 TC-PTP在癌组织中阳性表达的分析
• 3.3 TC-PTP在不同分化程度的癌组织中的表达
• 4 讨论
• 5 本章小节
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢