滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激影响的研究

论文摘要

目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）亦称为老年痴呆,是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,主要临床表现为进行性记忆力减退,认知功能障碍以及人格改变等。AD的主要病理特征是,大脑皮质和海马的神经细胞外出现β-淀粉样蛋白（amyliod-βprotein,Aβ）聚集形成的老年斑（senile plaque,SP）,及神经细胞内tau蛋白异常聚集形成的神经纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFTs）。至今AD的发病机制还不是很清楚。近年来研究发现AD与内质网（endoplasmic reticulum,ER）功能异常有关。内质网内未折叠/错误折叠蛋白堆积,钙离子失衡可引发内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）,内质网通过未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）纠正这些异常变化。过度的ERS导致细胞损害和死亡。其中葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCTTA/ EBP homologous protein,CHOP）和活化转录因子4（activating transcri- ption factor 4,ATF4）在ERS中分别起到重要的作用。对ERS的深入研究为阿尔茨海默病发病机制和防治提供了新的方向。滋补脾阴方药（Zibu Piyin recipe,ZBPYR）是战丽彬教授以清代吴澄《不居集》的资成汤为基础并结合多年实践化裁而成,以培补后天、滋补脾阴为立方原则,针对脾阴虚证而设。本课题组以往研究显示,ZBPYR具有显著的神经保护和抗脑衰老作用,且它对神经元的保护作用与内质网应激相关。本实验将进一步研究脾阴虚痴呆大鼠各脑区内质网应激情况及ZBPYR对内质网应激的作用,这对AD的防治具有重要意义。方法:1.将健康成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组、痴呆组、脾阴虚组、脾阴虚痴呆组和脾阴虚痴呆+ZBPYR组5组,每组7只。2.首先用复合因素建立脾阴虚证候模型,在此基础上通过双侧海马内注射聚集态的Aβ1-40（5μg/μl）建立痴呆疾病（AD）模型,最终建立脾阴虚痴呆的证病结合模型。停止施加造模因素后,脾阴虚痴呆+ZBPYR组给予药物治疗。3.通过RT-PCR方法检测各组大鼠不同脑区GRP78、CHOP和ATF4 mRNA表达的变化情况。4.通过免疫组织化学方法检测各组大鼠不同脑区GRP78、CHOP蛋白表达的变化情况。结果:1. RT-PCR结果显示,分别与空白对照组、脾阴虚组比较,痴呆组和脾阴虚痴呆组大鼠海马、纹状体、大脑皮质GRP78 mRNA表达水平明显下调（P<0.05）;CHOP、ATF4 mRNA表达水平明显上调（P<0.05）。与脾阴虚痴呆组比较,脾阴虚痴呆+ZBPYR组大鼠海马、纹状体、大脑皮质GRP78 mRNA表达水平明显上调（P<0.05）;CHOP、ATF4 mRNA表达水平明显下调（P<0.05）。2.免疫组织化学结果显示,分别与空白对照组、脾阴虚组比较,痴呆组和脾阴虚痴呆组大鼠海马（CA1区,CA3区,DG区）、大脑皮质GRP78蛋白表达水平明显下调（P<0.05） ; CHOP蛋白表达水平明显上调（P<0.05）。与脾阴虚痴呆组比较,脾阴虚痴呆+ZBPYR组大鼠海马（CA1区,CA3区,DG区）、大脑皮质GRP78蛋白表达水平明显上调（P<0.05）;CHOP蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。结论:1.脾阴虚痴呆大鼠学习记忆障碍可能与脑组织中ERS信号途径被干扰有关。2.脾阴虚痴呆大鼠学习记忆障碍可能与ATF4对Aβ及其他蛋白合成的促进有关。3. ZBPYR可能通过影响ERS信号途径,改善脾阴虚痴呆大鼠的学习记忆障碍。4. ZBPYR改善脾阴虚痴呆大鼠的学习记忆障碍的作用可能与抑制ATF4表达,减少Aβ及其他蛋白合成有关。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 附图
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、 本课题受如下基金资助