两对混合抗原在ELISA诊断结核分枝杆菌感染中的效果鉴定

论文摘要

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）引起的传染病,严重危害人类健康。近年来结核病和HIV的共感染以及多重耐药结核菌株的出现,使得结核病的防治越来越严峻。结核病的早期诊断对结核病的防治意义重大。所以,找到能够特异性诊断结核病的抗原至关重要,但是单独抗原的效果往往不理想。因此,筛选混合抗原成为提升结核病诊断效果的很好选择。我们进行了ELISA实验,筛选能够提高诊断效果的混合抗原,得到了以下结果：（1）筛选到了混合抗原Rv1040c+Rv2309A和Rv2309A+Rv3872。本研究采集了86份血清（结核病人71份,健康人15份）,分别用单独抗原Rv1040c、Rv2309A和Rv3872以及混合抗原Rv1040c+Rv2309A和Rv2309A+Rv3872进行ELISA检测,结果表明两对混合抗原在灵敏度、特异性和精确性方面都优于单独抗原（Rv1040c+Rv2309A灵敏度80.28%,特异性100%,精确性83.72%；Rv2309A+Rv3872灵敏度74.65%,特异性100%,精确性79.07%）。（2）通过与商业试剂盒TB-DOT和TB-CHECK-1进行对比,我们发现两对混合抗原在灵敏度、特异性和精确性方面都优于TB-DOT（灵敏度61.97%,特异性73.33%,精确性63.95%）,在灵敏度和精确性方面都优于TB-CHECK-1（灵敏度45.07%,精确性54.65%）。综上所述,本研究发现的两对混合抗原Rv1040c+Rv2309A和Rv2309A+Rv3872具有更好的结核病诊断能力,在诊断结核病方面有很好的应用前景。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略语
• 1 前言
• 1.1 结核病的危害
• 1.2 结核分枝杆菌与结核病
• 1.2.1 肺结核病简介
• 1.2.2 肺外结核病简介
• 1.3 结核病的防治
• 1.4 结核病的检测手段
• 1.4.1 结核病的临床确诊
• 1.4.2 胸肺X光检查（CXR）
• 1.4.3 结核菌素皮下测试（TST）
• 1.4.4 抗酸杆菌（acid-fast bacillus,AFB）痰涂片法
• 1.4.5 培养基法（culture）
• 1.4.6 核酸扩增（NAA）分析
• 1.4.7 血清学检测
• 1.5 本研究的目的和意义
• 1.6 本研究的主要内容
• 2 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验所用菌株
• 2.1.2 实验所用抗生素及培养基
• 2.1.3 实验所用质粒
• 2.1.4 实验所用酶、试剂和试剂盒
• 2.1.5 实验所用PCR引物序列及片段大小
• 2.1.6 本研究中的缓冲液及相关试剂的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 分子生物学基本操作
• 2.2.2 结核分枝杆菌基因Rv2309A和Rv1040c、Rv3872等的PCR扩增
• 2.2.3 pET28a表达载体的改造
• 2.2.4 蛋白质表达载体pET-Rv2309A和pET-Rv1040c、pET-Rv3872等的构建
• 2.2.5 结核分枝杆菌Rv2309A和Rv1040c、Rv3872等蛋白质的诱导表达
• 2.2.6 结核分枝杆菌Rv2309A和Rv1040c、Rv3872等蛋白质的非变性纯化
• 2.2.7 结核分枝杆菌Rv2309A和Rv1040c、Rv3872等蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测
• 2.2.8 采用Bradford方法测定结核分枝杆菌Rv2309A和Rv1040c、Rv3872等蛋白质的浓度
• 2.2.9 间接酶联免疫吸附实验（间接法ELISA）
• 2.2.10 使用商业试剂盒TB-DOT进行结核病的检测（对比实验1）
• 2.2.11 使用商业试剂盒TB-CHECK-1进行结核病的检测（对比实验2）
• 第三章 结果与分析
• 3.1 PCR扩增得到结核分枝杆菌基因Rv1040c、Rv2309A和Rv3872
• 3.2 构建并且验证了蛋白质表达载体pET-Rv1040c、pET-Rv2309A和pET-Rv3872
• 3.3 在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导和试表达了结核分枝杆菌Rv1040c、Rv2309A和Rv3872蛋白质
• 3.4 用非变性方法纯化结核分枝杆菌Rv1040c、Rv2309A和Rv3872蛋白质
• 3.5 用Bradford方法定量Rv1040c、Rv2309A和Rv3872蛋白
• 3.6 通过酶联免疫吸附（间接ELISA）实验得到结核分枝杆菌Rv1040c、Rv2309A和Rv3872蛋白质作为单独抗原以及Rv1040c+Rv2309A、Rv2309A+Rv3872作为混合抗原诊断效果
• 3.7 采用商业试剂盒TB-DOT对相同的血清进行检测
• 3.8 采用商业试剂盒TB-CHECK-1对相同的血清进行检测
• 3.9 ELISA和TB-DOT,TB-CHECK-1结果分析
• 4 总结与讨论
• 4.1 总结
• 4.2 讨论
• 附录
• 参考文献
• 致谢