上海地区鸡传染性支气管炎病毒流行株检测分析及siRNA的干扰效应

论文题目: 上海地区鸡传染性支气管炎病毒流行株检测分析及siRNA的干扰效应

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 刘惠莉

导师: 朱伟云,陆承平

关键词: 鸡传染性支气管炎病毒,片段,分子特性,小干扰,效应

文献来源: 南京农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 鸡传染性支气管炎病毒（Infecfious bronchitis virus,IBV）可引起鸡呼吸道、生殖道和肾脏病变及腺胃肿大,传染性强、致死率高,呈世界范围分布,是危害养禽业的重要疫病之一。IBV编码6种蛋白,位于病毒囊膜表面的纤突蛋白（S）是病毒主要的免疫原,S是由S1、S2亚单位组成。S1主要功能是结合细胞膜上受体,但只有在与S2的共同作用下,才能启动病毒与细胞膜融合。由于S1亚单位与病毒组织嗜性、致病性和免疫原性密切相关,对其研究较多,但作为协同作用启动IBV感染的S2片段,决定着IBV能否进入易感细胞而产生致病作用,因而明确S2亚单位生物学地位,以及S2与S基因进化间的关系,能更客观地分析IBV进化规律和致病分子基础。 IBV具有高度变异性,血清型众多,并且不同血清型之间交叉保护非常小或没有保护作用,因而对IBV的控制是个难点。探讨利用新技术控制IBV成为预防该病的一个重要课题。 RNA干扰（RNAi）是近年来发展起来的一项新技术,由于其具有强大的抗病毒效应,很快就成为控制病毒性疾病的新手段,尤其是一些重要病毒性疾病,现有药物和疫苗无法提供较好保护作用时,RNAi技术无疑提供了非常有前景的手段。RNAi已成功应用于多种病毒感染治疗,如脊髓灰质病毒、轮状病毒、呼吸道合胞体病毒、流感病毒、人严重急性呼吸道疾病。但对禽病毒方面却没有研究,有鉴于此,我们对利用siRNA技术控制IBV增殖的效果进行了研究。 1 上海地区IBV分离鉴定及S2基因检测、分析对临床发病疑似IB的鸡群,采集病料,接种9日龄SPF鸡胚,24h-48h收集尿囊液,盲传3代,RT-PCR检测、测序为IBV阳性的,取尿囊液电镜观察病毒粒子,部分在电镜下观察到典型的冠状病毒粒子,共分离到10株上海地区IBV流行株。根据GenBank中发表的IBV S基因序列,设计合成了一对引物,模拟PCR表明,该引物对能扩增现有已发表的所有IBV的S2基因核酸序列,扩增片段493bp。分别以本室保存的IBV疫苗株H52和IBV分离株建立了检测S2基因片段的RT-PCR体系,检测体系灵敏度达10-50ELD50,检出限量为0.1ng。对上海地区疑似IBV样品（肾、喉、气管）34份进行检测,阳性为32份。将扩增片段克隆入pMD18-T载体,经PCR鉴定和序列分析表明均为肾变型IBV S2基因片段。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

第一章鸡传染性支气管炎病毒(IBV)研究进展

1．IBV分子生物学研究进展

2．IBV基因组及其编码蛋白

2．1 IBV基因组

2．2 IBV转录与复制

2．3 IBV基因组编码蛋白及生物学功能

3．IBV分子流行病学研究进展

3．1 IBV不同病变型的研究

3．2 IBV分子变异

3．2．1 IBV分子变异研究的目的基因

3．2．2 IBV分子变异机制

3．2．3 IBV分子变异研究现状

4．IBV免疫预防研究进展

4．1 IBV高度变异性使得无法采用单一疫苗来预防

4．2 疫苗的使用导致变异株、重组株出现

4．3 疫苗的使用造成IBV分子变异频率加快

参考文献

第二章小干扰RNA(siRNA)介导基因沉默研究进展

1．内源性小RNA形成及干扰作用

2．RNAi作用机制

3．RNAi技术路线及应用

4．RNAi作用特点

5．外源siRNA诱导RNAi的应用

6．问题与展望

参考文献

第三章上海地区IBV分离鉴定及S2基因检测分析

1．中英文摘要

2．材料与方法

3．结果

4．讨论分析

5．参考文献

第四章 IBV在Vero细胞及鸡胚上RNAi效应

1．中英文摘要

2．材料与方法

3．结果

4．讨论分析

5．参考文献

第五章感染IBV雏鸡体内RNAi效应

1．中英文摘要

2．材料与方法

3．结果

4．讨论分析

5．参考文献

创新点

致谢

攻读学位期间发表论文

发布时间: 2005-07-19

参考文献

[1].脑心肌炎病毒河南流行株病原学、诊断方法和疫苗的研究[D]. 常洪涛.河南农业大学2015
[2].新城疫病毒山东流行株分子演化及抗原性变异分析[D]. 徐怀英.中国农业大学2014
[3].诺如病毒GⅡ型流行株基因组特征分析及进化机制研究[D]. 薛亮.华南理工大学2013

上海地区鸡传染性支气管炎病毒流行株检测分析及siRNA的干扰效应

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