论文摘要
目的：研究小剂量环磷酰胺（LD-CTX）联合环孢素A（CsA）对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的免疫和造血功能的影响,为AA寻求更为经济有效的治疗方法提供依据。方法：采用雌性Balb/c小鼠为供体,雌性昆明小鼠为受体。受体经X射线亚致死量（6Gy）全身均匀照射后,于4小时内自尾静脉输入供体淋巴细胞1×106/只制成免疫介导再生障碍性贫血模型。共150只昆明小鼠随机分为下列各组：1.不同时间给药组：分别于造模后第0、4、7d给药；2.不同CTX浓度给药组：1)LD-CTX联合CsA组：A组：CTX（10mg·kg-·1d-1）+CsA（5mg·kg-1·d-1）,连续5天；B组：CTX（20mg·kg-1·d-1）+CsA（5mg·kg-1·d-1）,连续5天；C组：CTX（30mg·kg-1·d-1）+CsA（5mg·kg-1·d-1）,连续5天；2)HD-CTX组：CTX （50 mg·kg-1·d-1）,连续4天；3)模型组：免疫介导再生障碍性贫血小鼠不做任何处理；4)CsA组：于造模后给予腹腔注射CsA （5mg·kg-1·d-1）,连续5天；5)正常对照组：为正常小鼠不做任何处理。动态观察各实验组小鼠一般情况,外周血细胞变化,计数双侧股骨骨髓有核细胞数,甲基纤维素半固体培养法测定CFU-GM集落数,小鼠濒死时（或制模后第28天）,取股骨行骨髓病理切片观察,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+、CD8+、CD4+、D25+、Foxp3+T细胞、Th1/Th2细胞的表达。结果：1.模型组小鼠外周血白细胞、血小板数量在造模后开始降低,第8-14天降至最低,脾淋巴细胞流式细胞检测CD3+、CD3+CD8+及IFN-γ明显升高,CD4+CD25+、Foxp3+T细胞降低,Th1/Th2细胞比例失衡,骨髓增生极度低下,有核细胞明显减少,脂肪细胞增多。2. LD-CTX联合CsA （A组和B组）小鼠较模型组造血功能明显改善,造模后第28天生存率较模型组高。与模型组比较,外周血白细胞及血小板数2周后持续上升,双侧股骨骨髓有核细胞数及CFU-GM集落数明显增多。骨髓病理切片显示：骨髓增生活跃,有核细胞增加,可见少量脂肪细胞填充骨髓腔。脾淋巴细胞CD3+、CD3+CD4+T及CD3+CD8+T细胞明显低于模型组,A组CD4+CD25+、Foxp3+T细胞明显高于模型组、Th1/Th2辅助性T细胞的比值较模型组明显降低,B组CD4+CD25+、Foxp3+T细胞则与模型组差别无统计学意义。3. HD-CTX组小鼠治疗早期死亡率高,造血功能无改善,骨髓病理切片显示骨髓增生极度低下,有核细胞明显减少,大量脂肪细胞填充骨髓腔。结论：1.昆明小鼠经X射线亚致死量（6Gy）全身均匀照射后,于4小时内自尾静脉输入BALB/c小鼠淋巴细胞1×106/只可制成免疫介导再生障碍性贫血模型。其致病过程类似于AA患者免疫发病机制。2.环磷酰胺对免疫功能的影响与剂量相关,大剂量环磷酰胺有免疫抑制作用；小剂量环磷酰胺兼有免疫抑制和免疫调节作用,对造血干细胞无明显影响。3.LD-CTX联合CsA可以纠正免疫介导AA小鼠的免疫调节紊乱,促进其造血功能的恢复。