论文摘要
血管内皮是由邻近于血管壁的单层细胞组成，其可以起到血液和组织间的屏障作用以及积极地参与血管功能的调节，血管稳态和舒张通过内皮细胞合成和释放的一系列内皮源性舒张和收缩因子来控制。NO、PGI2和内皮依赖性超极化因子（EDHF）是其分泌的重要的调节血管舒张功能的物质。而EDHF是近年来才发现的独立于NO和PGI2的第三种活性物质，目前对于在脑血管中的EDHF研究仍然知之甚少。硫化氢（H2S）是机体内一种重要的气体信号传递分子，和NO、CO气体分子一样在机体内起着重要的生理功能，其在体内的生成主要是由胱硫醚β合成酶（CBS）和胱硫醚γ裂解酶（CSE）分解L-半胱氨酸CSE和CBS均有组织特异性。CBS主要存在于脑组织中，而CSE主要存在于心脑血管系统中。RNAi是近年来沉默基因的一种技术，能够更加特异性地研究某种基因在特定组织中的作用。本文现对H2S气体分子在大鼠大脑中动脉对EDHF影响进行了深入的探讨。目的：采用siRNA技术，探讨H2S与EDHF介导大鼠大脑中动脉舒张反应的关系。方法：1、设计并化学合成三个特异性的和一个非特异性的CSE siRNA，分别为CSEsiRNA1、CSE siRNA2、CSE siRNA3和Neg CSEsiRNA。采用Lipofectamine2000介导转染EAhy926细胞，在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率，WesternBlot法检测CSE蛋白表达，收集细胞检测H2S含量。2、采用离体血管舒缩功能测定实验方法，检测乙酰胆碱（ACh）对大鼠离体MCA的舒张作用，并分别观察血管用一氧化氮（NO）合酶抑制剂(L-NAME，3×10-5mol/L)和前列环素（PGI2）合酶抑制剂(Indo，1×10-5mol/L)预处理后，用ACh诱导血管产生非NO、非PGI2舒张反应，并分别观察联合使用apamin（100nmol/L）和charbdoxin（0.5nmol/L）或PPG（1×10-4mol/L）对这种非NO、非PGI2舒张反应的影响，EAhy926细胞模拟介导的非NO、非PGI2反应以及CSEsiRNA转染细胞模拟介导的非NO、非PGI2反应。结果：1、观察转染效率为60%左右，在CSEsiRNA3组中CSE蛋白的表达从正常组的153.41±23.43和Neg-CSEsiRNA阴性对照组的150.22±17.56降至59.43±21.81，H2S含量从正常组的0.96±0.05mol/L/105和Neg-CSEsiRNA阴性对照组的0.95±0.06mol/L/105降至0.54±0.08mol/L/105在CSEsiRNA3组。2、在KCl （30mmol/L）预收缩的大鼠MCA血管环上, ACh发挥着浓度依赖性舒张大鼠MCA的作用，经过L-NAME (3×10-5mol/L)和Indo (10-5mol/L)预处理后,ACh对MCA仍具有舒张作用。但联合运用钙激活钾通道（KCa通道）阻断剂apamin（100nmol/L）和charbdoxin（0.5nmol/L）或CSE（内源性H2S合酶）抑制剂PPG(1×10-4mol/L)可显著地使这种MCA的舒张减弱或消失。3、在用3×10-5mol/L L-NAME和10-5mol/L Indo预处理的去除血管内皮的大鼠MCA上，ACh的舒张作用几乎被完全取消，加入EAhy926内皮细胞可使去除血管内皮的大鼠MCA产生模拟的非NO非PGI2介导舒张反应，最大舒张反应可达66.09±1.63%；但是转染CSEsiRNA的EAhy926内皮细胞却不能产生这种模拟的非NO非PGI2介导舒张反应。结论：1．在大鼠MCA中，ACh诱导的非NO、非PGI2舒张反应，即EDHF反应可能是H2S介导的。2．转染CSEsiRNA可取消EAhy926细胞对去内皮的大鼠MCA模拟的EDHF舒张反应。
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相关论文文献
- [1].CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H_2S的表达影响[J]. 安徽医科大学学报 2012(08)