动物源食品中β-内酰胺类抗生素残留高效液相色谱检测方法的研究

论文摘要

β-内酰胺类抗生素是指含有β-内酰胺环的一类抗生素,因为其强效的抗菌作用,成为目前在牲畜疾病预防和治疗中应用最多的一类抗生素。如果使用不当,不遵循休药期,就很容易导致该类抗生素残留在动物源性食品中。因此,必须加强对动物源食品中抗生素残留进行有效的检测和监控,从而使人民的饮食安全得到保障。本论文研究旨在探索动物源食品中β-内酰胺抗生素的多残留检测方法。通过优化动物源性食品前处理方法,建立高效液相色谱法检测动物源食品中残留的β-内酰胺类抗生素。论文主要分为以下五部分内容：第一章：简介了抗生素种类及β-内酰胺抗生素的结构,综述了动物源食品中抗生素残留分析技术的发展,以及针对各种动物源食品的样品前处理方法的原理、特点、应用。同时,也概括了我国动物源食品中抗生素残留现状以及动物源食品中β-内酰胺抗生素残留的分析研究进展、并在此基础上确定了论文的选题。第二章：以9种β-内酰胺抗生素为研究目标,优化了前处理条件：采用乙腈沉淀牛奶样品中的蛋白,磷酸盐缓冲溶液为提取液,20 kHz超声5 min,离心处理,固相萃取小柱净化,采用Agilent TC C18 （150 mm×4.6 mm i.d,5μm）色谱柱,选用磷酸盐-甲醇作流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,220 nm检测,在22 min内分离检测,在1～100μg/mL范围内,9种抗生素均有良好线性,检测限在0.5～2.5μg/L之间。通过超声辅助萃取,有效的提高了方法的检测限,并且实现了利用常规液相进行动物源食品中β-内酰胺抗生素的多残留准确分析。第三章：建立了柱前衍生-高效液相色谱法检测牛奶中青霉素残留。利用金属铜离子和青霉素在一定条件下形成稳定络合物,建立了一种高效液相色谱快速测定牛奶中青霉素残留的方法。样品经酸化乙腈沉淀蛋白,离心处理。经Agilent TC C18 （150 mm×4.6 mm i.d,5μm）色谱柱,选用甲醇-水作流动相,流速1.5mL/min,320 nm检测,在5 min内分离检测。青霉素和氨苄西林的质量浓度分别在0.05～1.0 mg/L、0.08～2.1 mg/L范围内呈良好的线性关系,检出限分别为1.5×10-5g/L、2.4×10-5g/L。线性相关系数0.996,相对标准偏差2.4%、1.8%（n=5）。同时,本文还研究了金属离子对青霉素分离效果的影响。该方法灵敏度高、选择性好,适合牛奶中青霉素残留的检测。第四章：建立了硫酸铵/聚乙二醇双水相体系结合高效液相色谱检测蜂蜜中多种头孢菌素的新方法。本研究通过优化双水相萃取技术,并结合高效液相色谱,以磷酸二氢钾溶液-乙腈梯度洗脱,在7 min之内分离了三种头孢菌素。建立了操作步骤简单,灵敏度高,检测蜂蜜中头孢菌素残留的新方法。第五章：对整个论文进行总结。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 插图和附表清单
• 英文缩写词表
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 我国兽药残留检测的现状
• 1.3 兽药种类
• 1.4 动物源食品中β-内酰胺抗生素检测技术研究进展
• 1.5 样品前处理技术研究进展
• 1.5.1 超声波辅助萃取（UWAE）
• 1.5.2 超临界流体萃取（SFE）
• 1.5.3 微波辅助萃取（MAE）
• 1.5.4 固相萃取（SPE）
• 1.5.5 固相微萃取（SPME）
• 1.5.6 基质固相分散（MSPD）
• 1.5.7 加速溶剂萃取技术（ASE）
• 1.5.8 双水相萃取技术（ATPE）
• 1.6 动物源食品中抗生素残留分析意义
• 1.7 论文研究内容
• 1.8 论文创新点
• 第二章 超声辅助萃取-高效液相色谱法同时测定牛奶中多种β-内酰胺抗生素残留
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 试剂与仪器
• 2.2.2 主要仪器
• 2.2.3 标准溶液的配制
• 2.2.4 样品处理
• 2.2.5 色谱条件
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 高效液相色谱条件的优化
• 2.3.1.1 流动相和色谱柱的选择
• 2.3.1.2 流动相梯度洗脱的确定
• 2.3.1.3 检测波长的选择
• 2.3.2 前处理方法的考察
• 2.3.2.1 固相萃取柱的选择
• 2.3.2.2 提取液的选择
• 2.3.2.3 萃取速度的影响
• 2.3.2.4 超声条件的确定
• 2.3.2.5 洗脱液浓度的选择
• 2.3.3 方法学考察
• 2.3.3.1 校正的曲线的制作以及检测限
• 2.3.3.2 样品回收率实验和重现性精密度的考察
• 2.3.4 实际样品的检测
• 2.4 结论
• 第三章 柱前衍生-高效液相色谱法检测牛奶中青霉素残留
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 试剂与仪器
• 3.2.3 主要仪器
• 3.2.4 样品处理
• 3.2.5 色谱条件
• 3.2.6 标准溶液的配制
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 衍生化条件的确定
• 3.3.1.1 金属离子种类的选择
• 3.3.1.2 金属离子加入量的影响
• 3.3.1.3 稀硫酸加入量的影响
• 3.3.1.4 反应时间的影响
• 3.3.1.5 反应温度的影响
• 3.3.2 色谱条件的考察
• 3.3.2.1 检测波长的确定
• 3.3.2.2 流动相的确定
• 3.3.3 衍生化机理
• 3.3.4 方法学的选择
• 3.3.4.1 校正曲线的制作和检测限
• 3.3.4.2 样品回收率试验和重现性精密度的考察
• 3.5 结论
• 第四章 硫酸铵-聚乙二醇双水相体系-高效液相色谱法检测蜂蜜中多种头孢菌素
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 试剂与仪器
• 4.2.2 主要仪器
• 4.2.3 标准溶液的配制
• 4.2.4 样品处理
• 4.2.5 色谱条件
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 高效液相色谱条件的优化
• 4.3.1.1 流动相和色谱柱的选择
• 4.3.1.2 流动相梯度洗脱的确定
• 4.3.1.3 检测波长的选择
• 4.3.2 前处理方法的考察
• 4.3.2.1 萃取剂聚合物的选择
• 4.3.2.2 无机盐种类的确定
• 4.3.2.3 无机盐浓度的选择
• 4.3.2.4 溶液酸度对体系分相的影响
• 4.3.2.5 PEG6000浓度的影响
• 4.3.3 方法学考察
• 4.3.3.1 校正的曲线的制作以及检测限
• 4.3.3.2 样品回收率实验和重现性精密度的考察
• 4.3.4 实际样品的检测
• 4.4 结论
• 第五章 总结
• 致谢
• 参考文献
• 附录A 攻读硕士期间发表论文目录