论文题目: 新型长效EPO的构建、表达及生物活性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 免疫学
作者: 张春莉
导师: 朱迅
关键词: 贫血,二聚体,生物活性,长效
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 红细胞生成素(EPO,erythropoietin)是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素,基因工程方法生产的重组人红细胞生成素在治疗肾性贫血及其它类型的贫血等方面有很好的疗效。为了增加其生物活性,及延长其半衰期,作者构建了三种不同启动子的重组人红细胞生成素(rhEPO)二聚体真核表达载体pBT-1c、pBT-2s、pBT-3c,及两个rhEPO 单体表达载体pBT-2se,pBT-3ce。比较其转染效率后,选择一种真核表达载体pBT-2s 稳定转染CHO-dhfr-细胞,经MTX加压,筛选到稳定高效表达rhEPO 二聚体融合蛋白的细胞株CHO-BTE,表达量达到33.3μg /106cell?d。经纯化得到rhEPO 二聚体融合蛋白,经检测分子量约为70KD,其体内及体外生物活性均显著高于rhEPO 单体。经大鼠体内的初步药代动力学试验,结果表明,此rhEPO 二聚体融合蛋白在大鼠体内的半衰期比rhEPO 单体半衰期延长。
论文目录:
第一章 文献综述
第一节 EPO 简介
第二节 新型促红细胞生成素
第三节 市场前景
第二章 长效rhEPO 二聚体融合蛋白的构建、表达及生物活性研究
第一节 前言
一、EPO 研究历史与现状
二、本研究的目的、内容和技术路线
三、本研究的理论意义和实用价值
第二节 材料和方法
一、材料
二、方法
(一) rhEPO 二聚体真核表达载体的构建和鉴定
(二) rhEPO 二聚体融合蛋白在CHO-dhfr-细胞中的表达
(三) rhEPO 二聚体融合蛋白的纯化
(四) rhEPO 二聚体融合蛋白的生物活性检测
(五) rhEPO 二聚体融合蛋白初步药代动力学检测
第三节 结果
一、rhEPO 二聚体真核表达载体的构建及鉴定
(一) 重组质粒 pGEMTE 及 pBT-1c 的鉴定
(二) 重组质粒 pBT-2s 及 pBT-3c 的鉴定
(三) 重组质粒 pBT-2se 及 pBT-3ce 的鉴定
二、rhEPO 二聚体融合蛋白表达细胞株的形态、表达量的鉴定
(一) 三种表达载体在COS-7 细胞中的瞬时表达
(二) CHO-dhfr-细胞的稳定转染及高表达细胞株的筛选
三、rhEPO 二聚体融合蛋白的纯化
(一) rhEPO 二聚体融合蛋白的纯化
(二) 纯化的重组蛋白电泳及蛋白质印迹
(三) 抗EPO 多克隆抗体的制备结果
四、rhEPO 二聚体融合蛋白的生物活性测定
(一) 重组蛋白的体外活性结果
(二) 重组蛋白的体内活性结果
五、rhEPO 二聚体融合蛋白的初步药代动力学结果
第四节 讨论
第五节 结论
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文
个人简历
中文摘要
Abstract
致谢
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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