淫羊藿素对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验性研究

论文摘要

【研究背景和目的】肝脏具有门静脉和肝动脉两套血供系统。其中,门静脉占入肝血流的70%-80%,肝动脉仅占20%-30%。肝脏独特的解剖结构特点,决定了肝脏较其他一些脏器的血流更为丰富。在现代肝脏外科手术中,对肝十二指肠韧带内肝固有动脉和门静脉主干进行阻断,能够大大减少术中出血。这种被称为“Pringle”的手法,从首次在动物实验中获得成功到今天被广泛运用于临床已有近百年的历史。虽然该法操作简单、很大程度上控制了肝创面的出血,但同时也极易引起肝脏的缺血再灌注损伤（IRI）,而IRI也是导致肝脏切除术后肝功不全和肝移植术后肝原发性无功能的主要原因之一。如何在既减少肝脏手术切除造成的大量失血的同时,又能减轻肝门阻断带来的缺血再灌注损伤,是肝脏外科临床中亟待解决的重要问题。目前应用于临床保护肝脏损伤的药物品种较多,但疗效均不十分理想。多种药物联合应用可能会有助于术后肝功能的恢复,但作用有限,且药物总量的增加势必会加重肝脏代谢的负担,甚至会产生肝脏毒性作用。因此,进一步研发能够更有效地改善术后肝脏功能,毒副作用少的新一代药物,无疑具有十分重要的临床价值。淫羊藿素（Icaritin）,分子量368,是由天然植物淫羊藿（Epmedium）中提取的黄酮类单体化合物。已有研究表明:淫羊藿素具有诱导细胞增殖分化、扩张心脑血管、抗肿瘤、类雌激素、提高性机能以及抗骨质疏松等作用。基于对同类化合物的研究以及淫羊藿素分子结构的相关分析,我们提出以下猜测:淫羊藿素依靠清除氧自由基（ROS）、抗脂质过氧化以及促进内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的表达,增加NO的分泌来发挥对缺血再灌注损伤器官的保护作用。本研究采用药物预处理的方式,通过建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型以证实如上假说,为能够行之有效地解决前述临床问题在基础研究领域做一次新的尝试。【研究方法】1.淫羊藿素脂质体的制备:采用薄膜分散法将淫羊藿素粉剂制备为淫羊藿素脂质体,供动物实验用。2.动物实验:选取健康雄性SD大鼠,随机分为淫羊藿素脂质体组（A）、空白脂质体组（B）、单纯损伤组（C）以及假手术组（D）。除假手术组外,所有大鼠70%肝脏（肝左叶和肝中叶）的血流阻断60 min,之后血流重新恢复。于再灌注2 h和6 h采集大鼠血液及肝组织标本,进行以下检测:1.血清ALT、AST含量;2.肝组织中丙二醛（MDA）和NO含量;3.肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮合成酶（NOS）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、eNOS以及髓过氧化物酶（MPO）活力;4.肝脏病理组织形态学;5.肝细胞凋亡指数（AI）。【研究结果】1.经初步评价淫羊藿素脂质体中脂质体含量高、药物包封良好,已能满足动物实验中静脉注射所需。2.动物实验结果:（1）再灌注2 h,A组中的ALT、MDA、MPO以及AI较B、C两组有明显下降;（2）再灌注6 h,A组中的ALT、AST、MDA和AI较B、C两组有明显降低,同时SOD、NOS、eNOS水平则显著升高;（3）不同再灌注时间点,病理组织形态学观察的肝脏损伤程度与ALT含量相关。【结论】本研究证实了先前对淫羊藿素药理作用的假说。我们得出以下结论:淫羊藿素预处理对IRI的肝脏具有保护作用。其机制可能与其清除氧自由基,增强SOD活力以及诱导肝脏eNOS的表达增加、促进NO的生成有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 第一部分 淫羊藿素脂质体的制备和质量评价
• 前言
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 三、实验结果
• 四、讨论
• 五、小结
• 第二部分 淫羊藿素预处理对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用
• 前言
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 三、实验结果
• 四、讨论
• 五、小结
• 参考文献
• 综述
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况
• 致谢