康脑灵胶囊调控神经元细胞凋亡对血管性痴呆的作用研究

论文摘要

目的:血管性痴呆近年来发病率逐渐升高,已成为全社会重要的公共卫生问题,导师在以往大量文献研究与几十年临床经验的基础上,创制了以活血化瘀、补肾益智为主要功效的康脑灵胶囊,临床应用取得了理想的治疗效果。为了进一步探讨本方治疗血管性痴呆的作用机理,我们重点开展对VD模型大鼠脑细胞凋亡的研究,以期更深入地揭示本方治疗血管性痴呆的作用机理。方法:建立高脂饮食基础上的脑缺血再灌注大鼠学习记忆障碍模型。通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆的改变。检测用药后大鼠血脂、血浆粘度及脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）的变化。重点采用免疫组化技术、激光共聚焦显微镜技术、流式细胞技术进行神经细胞凋亡、神经细胞内游离钙离子含量及凋亡调控基因Bcl-2、p53、Caspase-3蛋白表达的检测。结果:康脑灵胶囊能显著改善模型大鼠的学习记忆能力;改善体内自由基代谢;改善大鼠血脂及血液流变学指标;提高NO的含量及一氧化氮合酶（NOS）活力的表达;尤其是抑制神经细胞凋亡的作用比较明显,对抑制凋亡调控蛋白Caspase-3、p53和促进凋亡调控蛋白bcl-2的表达等均有明显作用,且对神经细胞内钙超载有明显的缓解作用。结论:康脑灵胶囊是治疗血管性痴呆的良药,安全有效。其作用机制可能与抑制神经细胞凋亡、改善自由基代谢,改善血脂及血液流变学指标及提高NO的含量及一氧化氮合酶（NOS）活力的表达有关。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 实验研究
• 试验一 康脑灵胶囊对血管性痴呆大鼠学习、记忆能力的影响
• 一、试验材料
• （一） 试验动物
• （二） 试验药物
• （三） 主要试剂和仪器
• 二、试验方法
• （一） 脂肪乳制备
• （二） 动物分组与给药
• （三） 模型操作
• （四） Morris 水迷宫的检测方法
• （五） 跳台实验
• （六） 实验数据处理方法
• 三、实验结果
• （一） 对脑缺血再灌注所致痴呆大鼠Morris 水迷宫各方向逃避潜伏期的影响
• （二） 对脑缺血再灌注大鼠Morris 水迷宫实验平台象限游泳距离的影响
• （三） 康脑灵胶囊对脑缺血再灌注所致脑损伤大鼠跳台试验的影响
• 四、小结
• 实验二 缺血性脑损伤大鼠脑组织一般病理形态学结果报告
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 载玻片的处理
• （二） 脑组织的固定及包埋
• （三） HE 染色步骤
• 三、实验结果
• 实验三 康脑灵胶囊对脑缺血再灌注大鼠血脂、血流变的影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 对实验模型大鼠血脂的影响
• （二） 对实验大鼠血液粘度及血小板聚集的影响
• （三） 实验数据处理方法
• 三、实验结果
• （一） 对实验模型大鼠血脂的影响
• （二） 对缺血再灌注所致脑损伤大鼠血液粘度的影响
• （三） 对缺血再灌注诱导脑损伤大鼠血小板聚集的影响
• 四、小结
• 实验四 对不完全性脑缺血损伤模型大鼠体内自由基代谢的影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 超氧化物歧化酶（SOD）活力检测：取脑组织匀浆，按测试盒说明书操作
• （二） 脂质过氧化物丙二醛（MDA）检测：取脑组织匀浆，按测试盒说明书操作
• （三） 对脑缺血再灌注大鼠脑组织中一氧化氮（NO）含量的测定
• （四） 实验数据处理方法
• 三、实验结果
• （一） 对脑缺血再灌注所致脑损伤大鼠MDA 含量及SOD 活力的影响
• （二） 缺血再灌注大鼠脑组织中一氧化氮（NO）含量的影响
• 四、小结
• 实验五 免疫组织化学技术对NOS、p53 蛋白表达的病理影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 免疫组化实验方法
• （二） 灰度值的测定及比较
• （三） 实验数据处理方法
• 三、实验结果
• 四、小结
• 实验六 对改善不完全性脑缺血损伤中海马CA1 区细胞内钙超载的影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 三、实验结果
• 四、小结
• 实验七 对大鼠海马CA1 区细胞凋亡及其调控基因蛋白表达的影响
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• （一） 采用流式细胞术对脑细胞凋亡检测
• （二） 对脑损伤大鼠海马CA1 区神经细胞调控基因bcl-2 蛋白表达的检测
• （三） 采用荧光分光光度计对缺血再灌注大鼠海马 CA1 区神经细胞凋亡调控基因Caspase-3 蛋白表达的检测
• （四） 实验数据处理方法
• 三、实验结果
• （一） 流式细胞术对脑细胞凋亡检测结果
• （二） 对大鼠海马CA1 区神经细胞凋亡调控基因bcl-2 蛋白表达的检测结果
• （三） 对大鼠海马CA1 区神经细胞凋亡调控基因 Caspase-3 蛋白表达的检测结果
• 四、小结
• 讨论
• 一、瘀阻脑窍、肾精不足是血管性痴呆的基本病机
• （一） 肾精不足为虚为本
• （二） 瘀阻脑窍为实为标
• 二、活血化瘀，补肾益智是治疗血管性痴呆的基本方法
• （一） 活血化瘀
• （二） 补肾益智
• 三、康脑灵胶囊组方配伍分析
• 四、康脑灵胶囊作用机理探讨
• （一） 康脑灵胶囊对缺血再灌注大鼠学习、记忆能力的影响
• （二） 改善自由基代谢，减轻血管性脑损伤
• （三） 对模型大鼠NO 含量和NOS 活力的影响
• （四） 抑制神经元钙超载，减轻脑组织损伤
• （五） 对不完全性脑缺血损伤大鼠海马CA1 区细胞凋亡的影响
• 五、本研究存在的不足及血管性痴呆今后研究的方向
• （一） 本课题存在的不足
• （二） 血管性痴呆今后研究的方向
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢
• 详细摘要