论文摘要
背景与目的T淋巴细胞是细胞免疫的主要效应细胞,其活化程度直接影响抗肿瘤治疗效果。调控T细胞增殖成为效应细胞需要抗原肽-MHC分子复合物介导的特异性刺激信号和B7、4-1BBL等分子提供的共刺激信号。如果在增殖分化过程中未能获得共刺激信号,T细胞可能会出现活化诱导的细胞死亡（activation-induced cell death, AICD）或者无能状态,进而导致抗肿瘤免疫功能低下。而通过低表达共刺激分子降低免疫原性,使得识别它的抗原提呈细胞或淋巴细胞得不到充分的活化信号,是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制之一。本课题通过克隆人4-1BBL胞膜外区及构建4-1BBL/anti-CD20融合蛋白来激活T细胞表面4-1BB信号通路、通过联合应用阿糖胞苷提高靶细胞表面B7分子的表达水平达到提高共刺激信号的目的,以促进淋巴细胞的活化,增强抗肿瘤免疫反应,更好地抑制肿瘤甚至彻底清除肿瘤。方法与结果第一部分实验中,体外用CytoTox96Nonradioactived Assay kit检测了4-1BBL胞膜外区蛋白联合anti-CD3/anti-Pgp微型双特异抗体对靶向的K562/A02细胞的细胞毒作用,用Calcein-AM法检测了4-1BBL胞膜外区蛋白及4-1BBL/anti-CD20融合蛋白联合anti-CD3/anti-CD20微型双特异抗体对靶向的Raji细胞的细胞毒作用,证明增强4-1BBL信号确实能够提高T细胞杀伤效果,而具有CD20和4-1BBL双靶向的融合蛋白激活信号能力较单一的4-1BBL分子更为理想,联合杀伤效果更为突出。在体内联合应用4-1BBL胞膜外区蛋白和anti-CD3/anti-Pgp治疗裸鼠K562/A02移植瘤,联合应用4-1BBL/anti-CD20和anti-CD3/anti-CD20治疗裸鼠Raji移植瘤,显著控制了肿瘤的生长并清除肿瘤,观察至100天未见肿瘤复发。第二部分实验中,取不同终浓度的抗代谢类化疗药阿糖胞苷（Ara-C）,作用靶细胞72h,FACS测定B7分子（CD80和CD86）表达。取不同终浓度Ara-C作用靶细胞72h,MTT法检测Ara-C对靶细胞的抑制率。确定使靶细胞CD80和CD86表达升高但又不产生抑制效果的Ara-C终浓度0.251μmol/l。Calcein-AM法测定双功能抗体联合Ara-C的体外杀伤活性,杀伤效果比未经Ara-C处理的效果明显（p<0.05）。体内采用K562/A02细胞移植瘤模型,联合阿糖胞苷和anti-CD3/anti-PGP Diabody治疗,效果优于双功能抗体单用,并且对防止肿瘤二次复发有很好效果。结论4-1BBL、4-1BBL/anti-CD20和anti-CD3/anti-Pgp、anti-CD3/anti-CD20联合使用体内外均有效激活T细胞,增强其杀伤作用。非抑制剂量化疗药阿糖胞苷使靶细胞CD80表达升高,再联合双功能抗体使体外介导T细胞杀伤靶细胞的效果提高近20%。体内K562/A02移植瘤模型也证实阿糖胞苷在双功能抗体的治疗中起到重要辅助作用,可以有效提升疗效。以上结果均说明共刺激途径的激活对于维持和提高T细胞杀伤能力是至关重要的。
论文目录
相关论文文献
- [1].双功能钛硅分子筛的表征及其催化性能[J]. 石油学报(石油加工) 2010(03)
- [2].电容-压敏双功能材料研究进展[J]. 电瓷避雷器 2012(02)
- [3].双功能离子液催化的Knoevenagel反应[J]. 盐城工学院学报(自然科学版) 2011(03)
- [4].绿色木霉非专一性产双功能酶的鉴定[J]. 安徽农业科学 2010(36)
- [5].极紫外Mg/SiC双功能多层膜反射镜的设计[J]. 上海电机学院学报 2010(04)
- [6].一种双功能变压器及其分析[J]. 电力系统保护与控制 2016(12)
- [7].双功能铝催化降解MTBE的试验研究[J]. 浙江大学学报(理学版) 2008(01)
- [8].双功能化SBA-15的制备及对水中Ni~(2+)的吸附行为[J]. 材料导报 2015(20)
- [9].BC15-4.9/0.981型双功能汽轮机改造技术和经济性分析[J]. 热电技术 2009(02)
- [10].水下双功能机器人的机械手设计与分析[J]. 机械 2015(06)
- [11].一种双功能吸附剂对水中毒死蜱的吸附与降解特性[J]. 广东化工 2015(17)
- [12].纤维素催化转化双功能催化体系的研究进展[J]. 化学与黏合 2012(01)
- [13].甲胺改性酸碱双功能Y沸石的制备和表征[J]. 化学学报 2009(16)
- [14].巨大卵巢无性细胞癌双功能彩色超声表现1例[J]. 河北医科大学学报 2008(06)
- [15].双功能温度控制系统研究[J]. 卫星电视与宽带多媒体 2019(14)
- [16].微型双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病细胞[J]. 中国免疫学杂志 2011(04)
- [17].双功能有机小分子模拟酯酶研究[J]. 有机化学 2009(04)
- [18].拟南芥双功能酶SAL1生物学功能的研究进展[J]. 植物学报 2016(03)
- [19].TEM原位光电双功能样品杆改造及电源系统优化设计[J]. 电子器件 2015(02)
- [20].绿色木霉产双功能酶的体外毕赤酵母表达优化[J]. 食品研究与开发 2012(02)
- [21].超级电容电池用多层次孔双功能炭材料[J]. 电池 2011(05)
- [22].双功能离子液体萃取剂[A336][P204]萃取Ce(IV)和F(I)的动力学(英文)[J]. Transactions of Nonferrous Metals Society of China 2014(06)
- [23].免疫亲和层析法纯化抗Pgp/抗CD3双功能抗体[J]. 中国免疫学杂志 2008(04)
- [24].双功能化吸附剂DSBA-15的制备及去除水中Co~(2+)的研究[J]. 北京石油化工学院学报 2019(02)
- [25].康宝ZTP108A-5双功能消毒柜故障一例[J]. 家电检修技术 2009(09)
- [26].基于“双功能、双基础、双报告”的政府会计系统核算体系研究[J]. 教育财会研究 2019(01)
- [27].基于Isosteviol的双功能手性硫脲催化剂的设计合成及应用[J]. 郑州牧业工程高等专科学校学报 2015(02)
- [28].抗人EGFR/抗CD3双功能抗体的制备、检测及对胃癌细胞毒性作用的实验研究[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2012(01)
- [29].单分散双功能化复合二氧化硅微球的可控合成[J]. 材料导报 2016(20)
- [30].新型荧光/EPR双功能次氯酸探针的构建及性能[J]. 高等学校化学学报 2017(09)