毛细管电泳酶联免疫分析法检测肿瘤标志物的研究

论文摘要

本工作将毛细管电泳—电化学检测技术引入免疫分析中，将辣根过氧化物酶（HRP）催化过氧化氢（H2O2）氧化邻氨基酚的酶促反应与其氧化产物的电极还原相偶合，利用毛细管电泳电化学检测技术间接检测邻氨基酚-H2O2-辣根过氧化物酶（HRP）体系中的HRP含量。用此方法检测人血清甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）、血清总甲状腺素（T4），并同时检测了血样中的PSA、HCG、CEA。全文共分为八章。第一章为绪论，介绍了毛细管电泳酶联免疫分析的发展和研究现状以及本课题的意义，第二章介绍了毛细管电泳电化学间接检测HRP的情况，第三到第七章分别为AFP，CEA，PSA，HCG，T4的检测，第八章为同时检测CEA，PSA，HCG。在最佳反应条件下，测定游离HRP检测限为1.09×10-12mol／mL（S／N=3），线性范围为2.3×10(-12～3.5×10-15mol／mL。利用此方法成功应用于检测人血清甲胎蛋白，灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为1.5～66.6 ng／mL，检测限为0.48 ng／mL（S／N=3）。用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的ELISA法进行对照，二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测癌胚抗原，灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为1.6～69.0 ng／mL，检测限为0.17 ng／mL（S／N=3）。用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的ELISA法进行对照，二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测前列腺特异性抗原，灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为2.1～80.2 ng／mL，检测限为0.22 ng／mL（S／N=3）。用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的ELISA法进行对照，二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测人绒毛膜促性腺激素，灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为1.7～132.5 ng／mL，检测限为0.30 ng／mL（S／N=3）。用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的ELISA法进行对照，二者相关性很好。利用此方法成功应用于检测总甲状腺素。灵敏度高于经典ELISA法。测定线性范围为1.7～260.0 ng／mL，检测限为1.0 ng／mL（S／N=3）。用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的ELISA法进行对照，二者相关性很好。利用此方法应用于同时检测CEA，PSA，HCG，成功实现了同时进行多种免疫体系的分离检测。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1. 毛细管电泳技术的方法和应用
• 1.1 毛细管电泳的历史发展过程
• 1.2 毛细管电泳的分离模式
• 1.3 毛细管电泳的进样技术
• 1.4 毛细管电泳检测技术
• 1.5 毛细管电泳技术的特点
• 1.6 毛细管电泳应用研究进展
• 1.6.1 小离子与细胞分析
• 1.6.2 手性分离
• 1.6.3 蛋白质分析
• 1.6.4 DNA及碎片分析
• 1.6.5 糖及其缀合物的分析
• 1.7 毛细管电泳技术的前景展望
• 2. 毛细管电泳—电化学检测技术
• 2.1 安培检测方式
• 2.1.1 离柱检测方式
• 2.1.2 柱端检测方式
• 2.2 安培检测电极形式
• 2.2.1 柱端盘电极
• 2.2.2 集成在柱电极
• 2.2.3 双电极
• 2.2.4 阵列电极
• 3 毛细管电泳电化学免疫分析
• 3.1 电化学酶联免疫分析
• 3.1.1 电化学分析测定方法
• 3.1.2 电化学免疫分析标记物
• 3.2 毛细管电泳免疫分析
• 3.3 毛细管电泳免疫分析的综合应用展望
• 4 课题意义及主要内容
• 4.1 课题意义
• 4.2 本论文的研究内容
• 4.2.1 毛细管电泳电化学免疫分析酶催化体系的研究
• 4.2.2 毛细管电泳电化学免疫分析测定多种抗原（抗体）
• 2O₂-HRP体系中的HRP'>第二章 毛细管电泳间接检测邻胺基酚-H₂O₂-HRP体系中的HRP
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 酶促产物纯品制备
• 2.2.2 实验步骤
• 3 结果与讨论
• 3.1 AP的电化学行为
• 3.2 运行缓冲溶液浓度和pH值的影响
• 3.3 分离电压的影响
• 3.4 检测电势的影响
• 3.5 进样时间和电压
• 3.6 检测AP的重现性、检测限和线性范围
• 3.7 HRP的检测
• 4 小结
• 第三章 毛细管电泳电化学免疫分析测定人血清甲胎蛋白
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验装置
• 2.2.2 实验过程
• 3 结果与讨论
• 3.1 最佳检测条件
• 3.2 AFP的检测
• 3.3 线性范围，精密度及检测限
• 3.4 血清样品分析
• 4 小结
• 第四章 毛细管电泳电化学免疫分析测定癌胚抗原
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验装置
• 2.2.2 实验过程
• 3 结果与讨论
• 3.1 最佳检测条件
• 3.2 CEA的检测
• 3.3 线性范围，精密度及检测限
• 3.4 血清样品分析
• 4 小结
• 第五章 毛细管电泳电化学免疫分析测定前列腺特异性抗原
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验装置
• 2.2.2 实验过程
• 3 结果与讨论
• 3.1 最佳检测条件
• 3.2 PSA的检测
• 3.3 线性范围，精密度及检测限
• 3.4 血清样品分析
• 4 小结
• 第六章 毛细管电泳电化学免疫分析测定人绒毛膜促性腺激素
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验装置
• 2.2.2 实验过程
• 3 结果与讨论
• 3.1 最佳检测条件
• 3.2 HCG的检测
• 3.3 线性范围，精密度及检测限
• 3.4 血清样品分析
• 4 小结
• 第七章 毛细管电泳电化学免疫分析测定总甲状腺素
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 试剂与仪器
• 2.1.1 仪器装置
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验装置
• 2.2.2 实验过程
• 3 结果与讨论
• 3.1 最佳检测条件
• 3.2 T4的检测
• 3.3 线性范围，精密度及检测限
• 3.4 血清样品分析
• 4 小结
• 第八章 毛细管电泳电化学免疫分析同时检测PSA、HCG、CEA
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表及待发表的学术论文目录