新型CpG ODN大规模筛选及其抗病毒作用的研究

论文题目: 新型CpG ODN大规模筛选及其抗病毒作用的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 包木胜

导师: 王丽颖

关键词: 寡脱氧核苷酸,干扰素,种属特异性,流感病毒,口蹄疫病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒,冠状病毒,清道夫受体

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: CpG ODN 是人工合成的含未甲基化CpG 基序的寡脱氧核苷酸,可分为三种类型:A型CpG ODN能够刺激浆细胞样树突状细胞(pDC)产生大量的IFN-α,并能强效激活NK 细胞;B 型CpG ODN 具有很强的刺激B 细胞增生能力;C型CpG ODN 兼有A 型及B 型CpG ODN 的作用。CpG ODN 能活化机体的天然免疫,诱导产生Th1 型免疫反应,在抵抗病毒感染、治疗肿瘤、抗过敏等方面有广泛的应用前景。我们新设计了190 多条CpG ODN,经过筛选,得到A 型CpG ODN 6 条,B 型CpG ODN 8 条,C 型CpG ODN 9 条,并申请了5 项国家发明专利。在此基础上,我们对抗病毒能力突出的CpG-302(C 型)和CpG-B4(A型)进行了较深入的研究。结果表明,CpG-302 属于一种新结构类型的C 型CpG ODN,其刺激的人PBMC 培养上清具有抗VSV、SARS-CoV 和流感病毒的作用,单独应用也能够直接保护细胞免受VSV 感染。CpG-B4 能够在一定程度上保护小鼠抵抗流感病毒的攻击,并能使乳鼠产生剂量依赖性抵抗口蹄疫病毒攻击的作用。因此,CpG-302 和CpG-B4 可能成为具有独立知识产权的新型抗病毒药物。

论文目录:

英文缩写词表

前言

文献回顾

1 病毒感染性疾病

1.1 机体对病毒的抵抗作用

1.2 病毒逃避免疫系统的机制

1.3 病毒感染性疾病的预防、治疗及存在的不足

1.4 病毒感染性疾病概述

2 CpG ODN 研究进展

2.1 CpG ODN 概述

2.2 CpG ODN 类型及结构特点

2.3 CpG ODN 的受体及其介导的信号转导

2.4 CpG ODN 对各类型细胞的刺激作用

2.5 CpG ODN 稳定性及生物学活性的增强

2.6 CpG ODN 作用的种属特异性和个体差异性

2.7 CpG ODN 的安全性

3 CpG ODN 在预防及治疗病毒感染性等疾病中的应用

3.1 作为病毒疫苗的佐剂

3.2 单独应用治疗病毒感染性疾病

材料方法

1 主要材料

1.1 试剂

1.2 试剂盒

1.3 细胞株及血细胞

1.4 病毒

1.5 实验动物

1.6 培养基

1.7 合成的CpG ODN

2 主要方法

2.1 CpG ODN 刺激淋巴细胞增生及诱导其分泌抗病毒物质的检测

2.2 CpG ODN 刺激人NK 细胞活性的检测

2.3 CpG ODN 刺激人浆细胞样树突状细胞培养上清细胞因子含量的检测

2.4 CpG ODN 活化淋巴细胞能力的检测

2.5 干扰素中和实验

2.6 CpG ODN 刺激淋巴细胞培养上清中细胞因子含量的检测

2.7 CpG ODN 单独抗VSV 能力的检测

2.8 CpG ODN 对细胞贴壁程度的影响

2.9 硫酸葡聚糖对各类型CpG ODN 作用的影响

2.10 乳鼠口蹄疫病毒实验

2.11 小鼠流感病毒实验

实验结果

1 CpG ODN 的筛选

1.1 CpG ODN 的质量检定

1.2 CpG ODN 的初步筛选

1.3 CpG ODN 的进一步筛选

1.4 CpG ODN 作用的种属特异性

2 CpG-302 诱导抗病毒活性的研究

2.1 CpG-302 刺激人PBMC 培养上清抗病毒能力的检测

2.2 CpG-302 对不同人PBMC 的刺激作用

2.3 CpG-302 对人PBMC 中各淋巴细胞群的激活作用

2.4 CpG-302 对NK 细胞杀伤的增强作用

2.5 CpG-302 对人B 细胞的刺激作用

2.6 CpG-302 刺激人PBMC 分泌细胞因子的检测

2.7 CpG-302 结构改变对其活性的影响

2.8 CpG-302 直接抗病毒能力的检测

2.9 CpG-302 作用与清道夫受体的关系

3 CpG-84 诱导抗病毒能力的研究

3.1 CpG-84 刺激小鼠抗流感病毒的作用

3.2 CpG-84 保护乳鼠抵抗口蹄疫病毒攻击能力的检测

图与照片

讨论

1 CpG ODN 能够刺激淋巴细胞分泌抗病毒物质

2 CpG-302 抗病毒作用特点

3 CpG-84 体内抗流感病毒和口蹄疫病毒的能力

4 CpG ODN 在抗病毒感染性疾病中的应用前景

结论

参考文献

攻读博士学位期间已(待)发表的文章和专利

中文摘要

Abstract

致谢

个人简历

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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