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Peroxiredoxin 6在糖尿病视网膜病变中抗氧化损伤的实验研究

2020-12-07阅读(129)

Peroxiredoxin 6在糖尿病视网膜病变中抗氧化损伤的实验研究

论文摘要

活性氧簇（ROS）是细胞正常代谢产生的有毒的产物,由于它可以与许多外源性物质发生反应,所以几乎所有的有机体都具有抗氧化解毒的机制,包括酶促的反应和非酶促的反应。当ROS产生的数量超过了正常机体抗氧化系统所能抵御的程度,就会发生氧化应激反应,因此也就导致细胞损伤。越来越多的证据表明氧化损伤是许多年龄相关性疾病发生发展的主要因素,包括心血管疾病,糖尿病,神经营养障碍以及白内障。Peroxiredoxins （PRDXs）是新进确定的非硒谷光甘肽过氧化物酶家族,据报道存在于许多主要的组织中,包括晶状体和视网膜。强有力的证据表明它们通过清除反应性氧化产物来平衡氧化-抗氧化体系,因此也就成为一种保护蛋白。Prx家族的大多数成员都含有二个做为催化部位的保守的半胱氨酸残基,因此也称为2-cysPrx。而1-cysPrx（peroxiredoxin 6 [Prdx6], antioxidant protein 2 [AOP2]）包含了单一的保守的半胱氨酸残基,做为清除磷脂氢过氧化物和其他过氧化物的关键的活性位点。1-cysPrx最初是从牛眼睫状体中分离出来,参与细胞抗氧化反应。本课题拟制备人Prx6基因的重组真核表达载体,进行体内外基因转染实验,探讨Prx6在氧化损伤的RPE细胞及糖尿病病变视网膜中的保护作用。实验首先采用免疫组织化学和RT-PCR法检测人RPE细胞及糖尿病大鼠视网膜Prx6的时相性表达及定位表达,并分析其表达与细胞凋亡的关系;其次,构建人Prx6真核表达载体pEGFP- Prx6,转染体外培养的RPE细胞,经G418筛选,建立Prx6基因稳定转染的RPE细胞系;然后采用过氧化氢及高糖培养诱导RPE细胞氧化损伤模型,观察Prx6基因转染对氧化应激条件下RPE细胞损伤的保护作用;最后将pEGFP- Prx6以脂质体介导转染糖尿病大鼠视网膜,通过RT-PCR及Western Blot观察Prx6的表达,通过Tunel法检测视网膜细胞凋亡,探讨Prx6体内过表达对糖尿病视网膜病变的保护作用。本研究的创新性在于构建人Prx6基因真核表达载体,并通过体外细胞实验及体内动物实验证实Prx6具有对抗氧化损伤,保护细胞,抵抗细胞凋亡的作用。

论文目录

  • 提要
  • 英文缩略词表
  • 第一篇 绪论
  • 第一章 Peroxiredoxin6 的研究进展
  • 第二章 氧化应激与视网膜色素上皮细胞损伤
  • 第三章 氧化应激与糖尿病视网膜病变
  • 参考文献
  • 第二篇 正文
  • 第一部分 Prx6 在氧化损伤RPE 细胞中的表达及其对RPE 细胞保护作用的研究
  • 第一章 Prx6 在氧化损伤人RPE 细胞中表达变化的研究
  • 第二章 pEGFP-Prx6真核表达载体的构建及转染RPE细胞的研究
  • 第三章 Prx6 高表达对 hRPE 细胞氧化损伤的保护作用
  • 第四章 Prx6 高表达对高糖诱导的 hRPE 细胞损伤的保护作用
  • 参考文献
  • 第二部分 Prx6 在糖尿病大鼠视网膜的表达及其对视网膜保护作用的研究
  • 第一章 Prx6 在糖尿病大鼠视网膜表达的实验研究
  • 第二章 pEGFP-Prx6 基因转染大鼠视网膜的研究
  • 参考文献
  • 附录1
  • 附录2
  • 攻读博士期间发表论文
  • 致谢
  • 中文摘要
  • ABSTRACT

    • 相关论文文献

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