论文摘要
实验目的:本实验以氧化应激（antioxidative stress）为实验模型,研究了欧洲越橘花色苷提取物对氧化应激发生时机体内抗氧化酶和抗氧化物的改变、线粒体功能以及线粒体膜电位变化的影响,探讨欧洲越橘花色苷提取物抗氧化应激可能的作用机制。实验方法:7周龄雄性昆明种小鼠用于本实验,复制三种动物模型来评价欧洲越橘花色苷提取物的抗氧化应激作用。（1）采用HPLC-ESI-MS对欧洲越橘花色苷提取物（Myrtillus DRY ALC.EX,BatchN.28770/M1,购自Indena S.p.A.（Milan,Italy））进行了定性定量分析,并采用ORAC（Oxygenradical absorbance capacity,抗氧化能力指数）和DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazy,1,1-二苯基苦基苯肼）两种体外实验方法评价了欧洲越橘花色苷提取物的体外抗氧化能力。（2）通过常压缺氧负荷小鼠模型观察欧洲越橘花色苷提取物对小鼠存活时间和耗氧量的影响,利用ORAC法测定血浆、大脑皮质及肝组织匀浆中的抗氧化能力指数,Griess化学法测定NO含量,以及TBARS法测定血浆、大脑皮质和肝组织匀浆中的丙二醛（MDA,malondialdehyde）含量。（3）200mg·kg-1溴酸钾腹腔注射诱导小鼠氧化应激性肾损伤,采用分光光度法测定血清尿素氮（BUN,blood urea nitrogen）含量,HPLC测定小鼠血清中肌酐（Cr,creatinine）含量,荧光酶标仪测定小鼠肾组织的ORAC值,分光光度法测定小鼠肾组织中MDA和黄嘌呤氧化酶（XOD,Xethione）含量,Griess化学法测定肾组织的NO含量的变化。并观察了欧洲越橘花色苷提取物给药后各指标的变化情况。（4）18h拘束负荷后诱发小鼠应激性肝损伤,分别用赖氏法测定小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性,硫代巴比妥酸法测定肝组织和血浆MDA水平,HPLC法测定谷胱甘肽（GSH,Glutathione）和维生素C含量,比色法测定XOD活性,Griess化学法测定NO水平,荧光酶标仪测定肝组织和血浆ORAC指数。（5）利用生物化学和分子生物学方法,从线粒体功能角度解析欧洲越橘花色苷提取物抗氧化应激作用的机制:利用紫外分光光度法检测肝脏线粒体呼吸链复合酶活性、细胞色素a,b,c,c1含量和Na+-K+-ATPnase活性,采用流式细胞术检测肝线粒体膜电位水平,采用RT-PCR检测肝脏SDHA-D和COXⅠ-ⅢmRNA表达的变化。实验结果:（1）HPLC-ESI-MS分析结果显示:欧洲越橘花色苷提取物含有15种花色苷,分别为Delphinidin（飞燕草花色素）、Cyanidin（矢本菊花色素）、Petunidin（牵牛花色素）、Peonidin（芍药色素）和Malvidin（锦葵花色素）的3-O-葡萄糖苷、阿拉伯糖苷和半乳糖苷。总花色苷的含量为42.04%（相当于cyanidin-3-glucoside）。（2）DPPH和ORAC两种体外抗氧化实验结果表明我们实验中所用的欧洲越橘花色苷提取物在体外有很好的抗氧化能力,特别是ORAC实验中,欧洲越橘花色苷提取物的体外抗氧化能力强于维生素C。（3）欧洲越橘花色苷提取物对常压缺氧负荷小鼠有一定的保护作用:明显提高常压缺氧小鼠的生存时间和对氧的利用能力,有效降低血浆、大脑皮质和肝组织匀浆中的MDA含量,并调节血浆、大脑皮质和肝组织中的NO含量。（4）实验证明200mg·kg-1KBrO3诱发小鼠氧化应激性肾损伤:BUN和血清肌酐含量显著升高。口服欧洲越橘花色苷提取物能有效的改善BUN和肌酐含量,同时可以降低肾组织MDA、NO、XOD水平,提高肾组织的ORAC水平。因此,我们推测欧洲越橘花色苷提取物对氧化应激性肾损伤的保护作用是通过降低机体内的过氧化状态实现的。（5）拘束18h,小鼠血浆ALT活性显著升高,结果提示拘束应激可以造成严重的肝损伤。同时我们还观察到血浆和肝组织内的MDA水平升高、ORAC指数下降。给予欧洲越橘花色苷提取物可以明显降低拘束负荷诱发小鼠血浆ALT活性升高,清除体内自由基,恢复肝组织GSH和vitaminC水平,降低肝组织过高的MDA和NO水平。（6）欧洲越橘花色苷提取物通过清除体内产生的过量活性氧自由基,改善拘束负荷小鼠肝组织线粒体呼吸链复合酶活性及其相关基因的表达,并改善线粒体膜电位和Na+-K+-ATPase活性。实验结论:欧洲越橘花色苷提取物可以改善氧化应激对机体造成的损伤,其改善机制可能通过清除自由基、维持体内抗氧化酶（剂）平衡和保护线粒体功能实现的。创新点:（1）从整体动物到分子生物学水平的不同层次探讨了欧洲越橘花色苷提取物的抗氧化应激的作用及其机制。（2）验证并提出拘束负荷应激选择性的抑制了线粒体呼吸链的第二条链。（3）结果提示欧洲越橘花色苷提取物缓解氧化应激状态是通过改善线粒体功能来实现的。
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标签：欧洲越橘花色苷提取物论文; 氧化应激论文; 线粒体论文; 活性氧自由基论文;