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柿叶黄酮抑制酪氨酸酶活性的研究

2020-12-11阅读(620)

柿叶黄酮抑制酪氨酸酶活性的研究

论文摘要

柿叶是柿的新鲜或干燥叶片,其味苦,具有止血、抗癌等多种医疗保健功能,柿叶的主要有效成分是黄酮类化合物。酪氨酸酶抑制剂（Tyrosinase Inhibitor,TI）通过抑制酪氨酸酶活性从而抑制黑色素的生成。因此,TI可以降低食品褐变程度从而可以作为保鲜剂。本文的目的是对柿叶中的黄酮类化合物的制备工艺进行优化,并研究其对酪氨酸酶的抑制效果及其在果蔬保鲜中的应用。1采用纤维素酶法提取柿叶黄酮（PLF）,在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据中心组合（Box-Benhnken）试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,依据回归分析各影响因素。以PLF得率为响应值作响应面和等高线,得出柿叶黄酮提取的最佳工艺条件为:加酶量9mg,酶解温度52℃、pH4.8、酶解时间130min,在上述最优条件下,柿叶黄酮得率达2.47%。2实验表明AB-8树脂的对柿叶黄酮分离效果最好,实验所得的最佳工艺为:上柱液pH值6,上柱液流速2BV/h,样液浓度为3mg/mL,70%乙醇为洗脱液,洗脱液流速控制在2BV/h,洗脱液用量为3BV。经此条件纯化后,PLF提取物中黄酮含量由9%提高到34%。AB-8大孔树脂可以较好地分离纯化PLF。3用L-酪氨酸为底物,用紫外分光光度法测定PLF对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,PLF对酪氨酸酶的抑制效果明显,其IC50值为2.38mg/mL,抑制作用属于可逆过程,其抑制类型为混合型,KI为0.33,KIS为0.48。4对PLF进行了抗氧化实验和络合Cu2+的实验。实验结果表明,PLF对DPPH·、超氧阴离子自由基(O2-·)和羟自由基（·OH）均有较好的清除率,对Cu2+有较强的络合能力。说明PLF对酪氨酸酶的抑制与其较强的抗氧化能力及其络合金属离子的能力有关。5以Vc含量、TSS含量和褐变度三个指标综合考察了PLF对鲜切苹果的保鲜效果。结果表明:PLF对鲜切苹果片具有一定的保鲜效果,当PLF浓度为0.1mg/m L,浸泡时间为5min时的保鲜效果最佳;PLF对鲜切苹果片的保鲜作用与其对酪氨酸酶的抑制和对多种自由基的清除作用有关,这可能是PLF对苹果片具有保鲜作用的机理之一。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 柿叶概述
  • 1.1.1 柿的种类及分布
  • 1.1.2 柿叶的主要成分及药用价值
  • 1.1.3 柿叶的开发利用及前景
  • 1.2 黄酮类化合物的概述
  • 1.2.1 黄酮类化合物的结构与种类
  • 1.2.2 黄酮类化合物的功能
  • 1.3 酪氨酸酶抑制剂（TI）概述
  • 1.3.1 TI的种类
  • 1.3.2 从天然产物中制备TI的主要方法
  • 1.3.3 TI的抑制机理
  • 1.3.4 TI的应用
  • 1.4 本课题研究的目的和内容
  • 1.4.1 柿叶黄酮的提取
  • 1.4.2 柿叶黄酮的分离纯化
  • 1.4.3 柿叶黄酮对酪氨酸酶活性的影响
  • 1.4.4 柿叶黄酮作用机理的初步探讨
  • 1.4.5 柿叶黄酮对鲜切苹果保鲜效果研究
  • 第二章 柿叶黄酮的提取工艺研究
  • 2.1 材料与方法
  • 2.1.1 材料
  • 2.1.2 试剂
  • 2.1.3 仪器
  • 2.1.4 实验方法
  • 2.2 结果与分析
  • 2.2.1 黄酮类化合物含量的测定
  • 2.2.2 酶法提取柿叶黄酮工艺条件的单因素实验
  • 2.2.3 响应面优化实验
  • 2.3 结论
  • 第三章 柿叶黄酮的分离纯化研究
  • 3.1 材料与方法
  • 3.1.1 材料
  • 3.1.2 试剂
  • 3.1.3 仪器
  • 3.1.4 实验方法
  • 3.2 结果与分析
  • 3.2.1 大孔吸附树脂的静态吸附实验结果
  • 3.2.2 AB-8树脂对柿叶黄酮的动态吸附结果
  • 3.3 结论
  • 第四章 柿叶黄酮对酪氨酸酶活性的影响
  • 4.1 材料与方法
  • 4.1.1 材料
  • 4.1.2 试剂
  • 4.1.3 仪器
  • 4.1.4 实验方法
  • 4.2 结果与分析
  • 4.2.1 不同浓度的柿叶黄酮对酪氨酸酶的影响
  • 4.2.2 柿叶黄酮与熊果苷对酪氨酸酶的抑制效果对比
  • 4.2.3 柿叶黄酮对酪氨酸酶的抑制效应
  • 4.2.4 柿叶黄酮对酪氨酸酶的抑制机理及抑制常数的测定
  • 4.3 结论
  • 第五章 柿叶黄酮作用机理的初步探讨
  • 5.1 材料与方法
  • 5.1.1 材料
  • 5.1.2 试剂
  • 5.1.3 仪器
  • 5.1.4 实验方法
  • 5.2 结果与分析
  • 5.2.1 柿叶黄酮的抗氧化作用
  • 2+的络合作用'>5.2.2 柿叶黄酮与Cu2+的络合作用
  • 5.3 结论
  • 第六章 柿叶黄酮的组分鉴定
  • 6.1 材料与方法
  • 6.1.1 材料
  • 6.1.2 试剂
  • 6.1.3 仪器
  • 6.1.4 实验方法
  • 6.2 结果与分析
  • 6.2.1 Sephadex LH-20初步分离的层析图谱
  • 6.2.2 Sephadex LH-20初步分离组分的紫外图谱
  • 6.2.3 HPLC分离分析
  • 6.3 结论
  • 第七章 柿叶总黄酮对鲜切苹果保鲜效果研究
  • 7.1 材料与方法
  • 7.1.1 材料
  • 7.1.2 试剂
  • 7.1.3 仪器
  • 7.1.4 实验方法
  • 7.2 结果与分析
  • 7.2.1 不同处理方式对苹果片可溶性固形物含量的影响
  • 7.2.2 不同处理方式对苹果片Vc含量的影响
  • 7.2.3 不同处理方式对苹果片褐变度的影响
  • 7.3 结论
  • 参考文献
  • 科研情况说明
  • 致谢

    • 相关论文文献

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