论文题目: 免疫磁珠法原代纯化培养人视网膜微血管内皮细胞与周细胞及炎症与缺氧对其PDGF-B/PDGFR-β和Ang-1/Tie2表达的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 眼科学
作者: 刘洪雷
导师: 惠延年
关键词: 糖尿病视网膜病变,内皮细胞,周细胞,炎症,缺氧,血小板,衍生生长因子,血管生成素,血小板衍生生长因子受体,肿瘤坏死因子,二氯化钴,细胞培养,磁珠
文献来源: 第四军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 研究背景 糖尿病视网膜病变(DRP)是大多数发达国家工作年龄人群致盲的首要原因,是最常见的视网膜血管性疾病。在中国,目前有超过5000万糖尿病患者,并以每年10%的速度增加。世界范围内糖尿病患者人数的增加提示DRP将来依然是视力丧失以及视功能损害的主要原因。 DRP的确切发病机制依然未明。周细胞丢失、微动脉瘤形成、非细胞性毛细血管形成是糖尿病患者视网膜早期病变的特征;视网膜新生血管的形成则是增生性糖尿病视网膜病变的基本病变。研究糖尿病视网膜病变的发病机制,是当前研究的一个焦点,也是防治糖尿病致盲的前提条件。病理性新生血管的共同特征包括血管渗透性异常、血管重塑与成熟缺陷,它将加速渗漏、出血以及炎症。在DRP的病理性血管生成过程中,视网膜微血管内皮细胞与周细胞是作用的关键靶点,在DRP发病机制以及发展中具有重要作用。为了在体外研究视网膜微血管内皮细胞与周细胞的特征,已经采用了许多方法进行原代培养,但依然存在纯化、富集的困难。纯化的方法包括不同的选择性培养基、细胞滤器、克隆、周细胞除杂、添加生长因子、肝素,最近某些种类的细胞已经采用结合不同标记物的磁珠进行纯化。 在糖尿病视网膜病变,据推测周细胞是导致血管内皮细胞继发改变的首先受累细胞,导致调节障碍的血管生成。但是,在早期糖尿病视网膜
论文目录:
目录
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言
文献回顾
正文
1 采用CD31免疫磁珠改良纯化人眼视网膜微血管内皮细胞与周细胞体外培养
1.1 材料和方法
1.1.1 主要设备、实验器材、试剂及缓冲液
1.1.1.1 主要设备
1.1.1.2 实验器材
1.1.1.3 主要试剂
1.1.1.4 实验配制试剂
1.1.2 实验方法
1.2 结果
1.3 讨论
2 人眼视网膜微血管内皮细胞与周细胞的细胞生物学特点及免疫组化鉴定
2.1 材料和方法
2.1.1 主要设备、实验器材
2.1.1.1 主要设备
2.1.1.2 主要试剂
2.1.2 实验方法
2.1.2.1 形态学观察
2.1.2.2 免疫组化
2.1.2.3 台盼蓝拒染细胞活力实验
2.1.2.4 细胞生长曲线测定
2.1.2.5 细胞冻存与复苏
2.2 结果
2.2.1 细胞形态学观察结果
2.2.2 细胞形态学观察结果
2.2.3 内皮细胞细胞免疫组织化学结果
2.2.4 周细胞细胞免疫组织化学结果
2.2.5 人视网膜微血管内皮细胞生长规律
2.2.6 人视网膜微血管周细胞生长规律
2.2.7 台盼蓝活力拒染率结果
2.3 讨论
3 炎症与缺氧对人眼视网膜微血管内皮细胞与周细胞PDGF-B／PDGFR-β与Ang-1／Tie2表达影响的体外研究
3.1 材料和方法
3.1.1 主要设备、实验器材、试剂及缓冲液
3.1.1.1 主要设备
3.1.1.2 实验器材
3.1.1.3 主要试剂
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 细胞培养与分组
3.1.2.2 免疫组化、免疫荧光
3.1.2.3 Western blot
3.1.2.4 RT-PCR
3.2 结果
3.2.1 免疫组化、免疫荧光
3.2.1.1 常规剂量(100ng/ml)TNF-α组
3.2.1.2 大剂量(2450ng/ml)TNF-α组
3.2.1.3 CoCl_2组
3.2.1.4 大规剂量TNF-α与COCl_2联合作用组
3.2.2 Western blot分析
3.2.2.1 TNF-α常规剂量组
3.2.2.2 TNF-α大规剂量组
3.2.2.3 CoCl_2组
3.2.2.4 大规剂量TNF-α与CoCl_2联合作用组
3.2.3 RT-PCR半定量分析
3.2.3.1 TNF-α常规剂量组
3.2.3.2 COCl_2
3.2.3.3 TNF-α大规剂量组
3.2.3.4 大规剂量TNF-α与CoCl_2联合作用组
3.3 讨论
小结
参考文献
附图
个人简历和研究成果
致谢
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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