结核分枝杆菌27000抗原的克隆、表达

论文摘要

目的克隆结核分枝杆菌（MTB）LprG基因,并在大肠杆菌中重组表达MTB27 000抗原,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法培养MTB菌株并提取其基因组DNA。采用聚合酶链反应（PCR）从MTB基因组中扩增出LprG基因,将目的片段纯化回收后,克隆到pEASYT1Simple载体中,转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,取阳性重组质粒经限制性核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切鉴定后再进行测序分析。用限制性核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ从重组质粒pEASY T1Simple-LprG中切下LprG基因,并插入到经同样双酶切的表达载体pET28a（+）中,转化入大肠杆菌Ecoli DH5α中,提取质粒进行双酶切鉴定。将重组表达载体pET28a（+）-LprG转化入Ecoli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定及可溶性分析。结果从MTB基因组中扩增出711bp的LprG基因。测序结果显示扩增产物与GenBank中MTB H37Rv LprG基因序列一致。重组表达载体pET28a（+）-LprG经双酶切后,得到目的基因大小相同的两个片段,表明重组表达载体构建成功。携带有pET28a（+）-LprG的大肠杆菌E.coli BL21（DE3）,经IPTG诱导后,在27kDa处获得目的蛋白,Western-blot分析该蛋白为所表达的目的蛋白。可溶性分析该蛋白以可溶性和包涵体两种形式共同存在,但主要以可溶性形式为主。结论成功地克隆出MTB LprG基因;构建了MTB 27 000抗原的重组表达载体pET28a（+）-LprG,并在大肠杆菌中获得了高效表达,为以后研究奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 插图或附表清单
• 注释说明清单
• 引言
• 第一章 结核分枝杆菌抗原免疫学诊断研究进展
• 1.1 免疫学诊断方法
• 1.1.1 细胞免疫学检测
• 1.1.2 体液免疫学检测
• 1.2 结核分枝杆菌抗原
• 1.2.1 分泌抗原
• 1.2.2 胞壁脂膜抗原
• 1.2.3 胞浆应激蛋白抗原
• 1.2.4 联合检测
• 1.3 结语
• 第二章 结核分枝杆菌27 000抗原的克隆、表达
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介及读研期间主要科研成果