论文摘要
目的采用TaqMan探针技术,建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）,应用该方法检测iASPP mRNA在肝癌及其癌旁组织、正常肝组织中以及人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721中的表达情况,分析iASPP与肝癌的相关关系,探讨iASPP在肝细胞癌发生发展中的可能作用及其临床意义。方法①根据基因数据库iASPP序列（序列号:NM006663）和TaqMan实时荧光定量分析原理,应用primer express 2.0软件设计iASPP特异性引物,同时设计一条能与PCR产物特异杂交的iASPP特异性TaqMan探针。②在PCR反应体系中加入与模板互补的TaqMan探针,根据10倍系列稀释cDNA浓度和其循环域值（Cycle threshold,Ct）制作标准曲线,建立荧光定量RT-PCR检测iASPP mRNA相对含量的方法,并对本方法进行方法学评价。③收集46例新鲜肝癌及其癌旁组织、6例正常肝破裂组织标本,并培养两株人肝癌细胞株HepG2及SMMC-7721,提取组织和细胞株当中总RNA,逆转录为cDNA,以管家基因β-actin为内标基因,进行实时荧光定量PCR反应,检测各样本中iASPP基因的表达水平。结果①成功建立了实时荧光定量RT-PCR的iASPP mRNA检测方法,扩增效率高（﹥95%）,重复性稳定（批内和批间CV为2.2～3.1和2.0%）;②82.6%的肝癌组织、47.8%癌旁组织及SMMC-7721细胞中均有iASPPmRNA的表达,而正常肝组织仅有1例（占16.7%）表达,HepG2细胞株中不表达iASPP;③原发性肝癌组织中iASPP mRNA表达水平显著高于其癌旁组织（P<0.05）;④iASPP mRNA的相对表达水平在原发性肝癌的肿瘤大小、病理分级中有显著差异（P<0.05）,肿瘤组织越大,分化程度越低,iASPP表达水平越高。结论①荧光定量RT-PCR检测iASPP mRNA具有敏感、特异、快速等特点,为iASPP基因的检测提供了有用的手段;②iASPP mRNA在肝癌中的高表达,可能通过抑制p53的促细胞凋亡功能导致细胞凋亡减少而形成肿瘤。③iASPP在肝癌中的表达与肿瘤大小,病理分级密切相关,提示该基因的扩增情况可能为临床提供预后和肿瘤恶性程度的参考指标。