缓激肽对氧化应激诱导的心肌细胞衰老的影响及其机制

论文摘要

研究目的:探讨缓激肽对氧化应激诱导的心肌细胞衰老的影响及其可能的分子机制。实验方法:1. H9C2细胞的传代培养。H9C2细胞购置于美国模式培养集存库（American type culture collection,ATCC）。按常规培养于含10%FBS的DMEM（含有青霉素和链霉素）培养基中,将H9C2细胞放入37℃,含5%CO2的培养箱中培养。当H9C2细胞长到一定密度后进行1:3传代。实验采用4-12代细胞。2. H2O2诱导H9C2细胞衰老。H9C2细胞在6孔板长到每孔大约5000个细胞时,便加入各种浓度的H2O2 ,诱导DNA损伤和衰老。2小时后,更换培养基,再培养3天。用衰老相关性β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidase ,Sa-β-gal）染色法检测衰老细胞数目。用Caspase-3活性检测方法来检测H2O2诱导的H9C2细胞凋亡情况。确定合适的干预浓度。3. H9C2细胞衰老的检测。用Sa-β-gal染色法检测衰老细胞数目。用Western-blot方法来检测P21在H9C2细胞中的表达。用彗星实验检测H2O2诱导的H9C2细胞DNA损伤情况。4. BK对H2O2诱导的H9C2细胞衰老的作用及可能机制。各种浓度的BK在诱导衰老前30分钟加入。而B2受体拮抗剂HOE-140和NO合酶抑制剂硝基左旋精氨酸甲酯（Nitro levorotatory arginine methyl ester ,L-NAME）干预时间要比BK提前5分钟。然后用Sa-β-gal染色法检测衰老细胞数目。实验结果:1.在H2O2浓度为20-100 u mol/L时,衰老细胞数目增加和H2O2浓度呈剂量依赖性。当H2O2浓度大于100 u mol/L时就会导致凋亡。但是当H2O2浓度为30 u mol/L时并不会引起Caspase-3活性增高。因此,选择30 u mol/L作为干预浓度。2. BK与H2O2诱导的衰老细胞数目呈剂量依赖性减少,但是在没有H2O2诱导的组中并不具有此作用。3. Western blot检测结果显示:BK能够显著地减少P21表达水平（P<0.05）,表明BK能够保护H9C2细胞衰老。4.彗星实验结果显示:H2O2能显著地增加olive尾含量（P<0.05）,即能显著增加DNA损伤。BK能显著地减少olive尾含量（P<0.05）,表明BK能够保护DNA免受损伤。5.结果显示:B2受体拮抗剂HOE-140和NO合酶抑制剂L-NAME均能显著增加衰老细胞数目（P<0.05）,表明HOE-140和L-NAME均能拮抗BK的保护作用,认为B2受体和NO合酶途径共同参与了此作用。结论:BK抑制氧化应激诱导的心肌细胞衰老,其机制可能是BK通过B2受体激活NO合酶途径抑制DNA损伤。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究背景
• 1. 缓激肽及其受体
• 2. 氧化应激与细胞衰老
• 实验材料
• 一、主要实验仪器
• 二、主要试剂
• 三、主要试剂的配置
• 实验方法
• 一、H9C2 细胞的传代培养
• 2O₂诱导 H9C2 细胞衰老和实验分组'>二、H₂O₂诱导 H9C2 细胞衰老和实验分组
• 三、Sa-β-gal 染色法检测衰老细胞
• 四、Caspase-3 活性检测凋亡细胞
• 五. Western blot 检测 P21 的表达
• 六、彗星实验检测 DNA 损伤
• 七、统计学分析
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述 缓激肽在心血管方面的作用和机制
• 参考文献
• 致谢