苯丙氨酸二肽类化合物Y101抗乙肝病毒机制研究

论文摘要

目的：研究苯丙氨酸二肽类化合物Y101（Phenylalanine dipetide compoundsY101,PDCY101）体外抗乙肝病毒作用和对免疫功能的影响，并探讨其作用机制。方法：1.体外实验（1）Y101对2.2.15细胞的毒性实验：用24孔板接种2.2.15细胞48小时后，加5种不同浓度Y101药液（100、75、50、25、12.5μg/ml）,每4天换一次药液，维持8天，用显微镜观察细胞病变，计算其半数细胞毒浓度（TC50）和最大无毒浓度（TC0）；（2）在Y101无毒浓度以下（50μg/ml），设50、25、12.5μg/ml3个浓度组、拉米夫定阳性对照组（50μg/ml）和2.2.15细胞对照组，分别收集给药4天、8天及停药4天的细胞和培养液，酶联免疫法（ELISA）测定培养液中HBeAg和HBsAg的含量（；3）普通PCR定性检测Y101对2.2.15细胞中HBV-DNA和cccDNA表达量的影响，实时荧光定量PCR准确检测各组2.2.15细胞中所提取的HBV-DNA和cccDNA含量；（4）3H同位素标记法研究体外Y101对鸭乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）的抑制效果。2.体内实验（1）采用碳廓清试验和血清溶血素试验，观察Y101对正常Balb/C小鼠的非特异性免疫的影响以及对正常昆明小鼠体液免疫的影响。结果：1.体外实验（1）Y101对2.2.15细胞半数细胞毒浓度（TC50）为79.44μg/ml，最大无毒浓度（TC0）为50μg/ml。（2）与1%DMSO细胞对照组相比，Y101（50μg/ml）对HBsAg具有一定的抑制作用，在给药4天、8天和停药4天的平均抑制率分别为31.80%、47.09%、40.08%；对HBeAg抑制率相对较低，给药4天、8天和停药4天的平均抑制率分别为5.76%、20.98%、3.61%；（3）Y101（50μg/ml、25μg/ml）对2.2.15细胞内HBV DNA和cccDNA的表达具有不同程度的抑制作用，在细胞培养的8天高剂量组（50μg/ml）的抑制作用达到最大，HBV DNA和cccDNA的平均抑制率分别为83.4%和75.8%，且在停药后4天仍保持较高的抑制率（。4）Y101对鸭乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）无抑制作用，阳性对照药磷甲酸钠（PFA）对DHBV RCs DNAP的IC50为1.27μM。2.体内实验（1）巨噬细胞吞噬功能试验，与正常组相比，Y101（100mg/kg）具有提高正常小鼠吞噬指数（α）的作用（P<0.05）；（2）血清溶血素实验，与模型组相比，Y101（100mg/kg、50mg/kg）能够显著提高小鼠血清溶血素水平（P<0.01），并可以增加脾脏、胸腺等免疫器官的重量（P<0.01）。结论：（1）Y101明显抑制2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌和细胞内HBV DNA和cccDNA的表达，表明其具有一定的抗乙肝病毒的活性。（2）Y101抗乙肝病毒的作用不是通过抑制DNA聚合酶，而可能是通过直接抑制细胞内cccDNA表达。（3）Y101可以增加小鼠免疫器官的重量，增强正常小鼠非特异性免疫功能和体液免疫功能。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 体外实验
• 1. 苯丙氨酸二肽类化合物 Y101 对 2.2.15 细胞分泌 HBsAg 和 HBeAg 的影响
• 1.1. 实验材料
• 1.2. 实验方法
• 1.3. 实验结果
• 1.4. 讨论
• 2. 苯丙氨酸二肽类化合物 Y101 对 2. 2. 15 细胞内 HBV DNA 和 cccDNA 的影响
• 2.1. 实验材料
• 2.2. 实验方法
• 2.3. 实验结果
• 2.4. 讨论
• 3. 苯丙氨酸二肽类化合物 Y101 对鸭乙型肝炎病毒 DNA 聚合酶的影响
• 3.1. 实验材料
• 3.2. 实验方法
• 3.3. 实验结果
• 3.4. 讨论
• 第二部分 苯丙氨酸二肽类化合物 Y101 免疫调节的体内实验
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 3. 实验结果
• 4. 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 A 中英文术语缩略语对照表
• 附录 B 常用试剂配制
• 附录 C 个人简历及发表论文
• 附录 D 综述
• 参考文献