本文主要研究内容
作者张艺钟（2019）在《玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞线粒体DNA损伤及其机制的初步研究》一文中研究指出：线粒体是细胞内生成ATP最多的细胞器,也是体内ROS的重要生成场所,因此线粒体和线粒体DNA(mtDNA)可能处于高氧化胁迫环境中,很容易发生氧化损伤。哺乳动物线粒体的专一性来源于卵母细胞,卵母细胞内线粒体及mtDNA的损伤必然会影响到卵母细胞的成熟乃至整个受精卵发育的过程。为了探究玻璃化冷冻对小鼠mtDNA的损伤及其机制,本研究以小鼠卵母细胞作为材料,共分为三组,分别为新鲜对照组、冷冻液处理组和冷冻-复苏组。通过PCR、qPCR、Elisa等实验方法探究玻璃化冷冻对卵母细胞mtDNA拷贝数、3867bp(9089位点到12956位点)缺失、8-OHdG含量以及β-半乳糖苷酶活性的影响,结果如下:1、经荧光定量PCR检测各组卵母细胞mtDNA的CQ值,发现冷冻-复苏组卵母细胞mtDNA的CQ值(33.52±0.4419),显著高于新鲜对照组(22.63±0.3404)和冷冻液处理组(24.35±0.1015)(P<0.05)。荧光定量CQ值越高,说明卵母细胞mtDNA拷贝数越低。结果表明冷冻-复苏导致卵母细胞mtDNA的拷贝数发生明显变化,显著低于新鲜对照组和冷冻液处理组。由此可见,玻璃化冷冻会使卵母细胞mtDNA的拷贝数显著减少。2、经半定量PCR法检测各组卵母细胞mtDNA3867bp片段的缺失情况,发现冷冻-复苏组经PCR扩增后,卵母细胞mtDNA产生了大量的3867bp片段缺失,在电泳图中有相关条带出现,而新鲜对照组和冷冻液处理组未有相关条带的出现。3、经Elisa法检测各组卵母细胞β-半乳糖苷酶的活性,发现冷冻-复苏组卵母细胞β-半乳糖苷酶吸光度(0.0529±0.0002),显著低于新鲜对照组(0.0734±0.0006)和冷冻液处理组(0.0756±0.0007)(P<0.05)。β-半乳糖苷酶吸光度越低,说明其活性越高,结果表明冷冻-复苏导致卵母细胞β-半乳糖苷酶活性发生明显变化,显著高于新鲜对照组和冷冻液处理组。4、经Elisa法检测各组卵母细胞mtDNA的8-OHdG浓度变化,发现冷冻-复苏组卵母细胞mtDNA的8-OHdG浓度(0.1538±0.0987),显著高于新鲜对照组(0.0339±0.0007)和冷冻液处理组(0.0642±0.0018)(P<0.05),而冷冻液处理组卵母细胞mtDNA的8-OHdG浓度也显著高于新鲜对照组(P<0.05)。由此可见,玻璃化冷冻及冷冻保护液处理均会使卵母细胞8-OHdG浓度显著增加。结论:玻璃化冷冻会使小鼠卵母细胞线粒体DNA的拷贝数降低,3867bp片段缺失增多,mtDNA上8-OHdG浓度升高,β-半乳糖苷酶活性升高。
Abstract
xian li ti shi xi bao nei sheng cheng ATPzui duo de xi bao qi ,ye shi ti nei ROSde chong yao sheng cheng chang suo ,yin ci xian li ti he xian li ti DNA(mtDNA)ke neng chu yu gao yang hua xie pai huan jing zhong ,hen rong yi fa sheng yang hua sun shang 。bu ru dong wu xian li ti de zhuan yi xing lai yuan yu luan mu xi bao ,luan mu xi bao nei xian li ti ji mtDNAde sun shang bi ran hui ying xiang dao luan mu xi bao de cheng shou nai zhi zheng ge shou jing luan fa yo de guo cheng 。wei le tan jiu bo li hua leng dong dui xiao shu mtDNAde sun shang ji ji ji zhi ,ben yan jiu yi xiao shu luan mu xi bao zuo wei cai liao ,gong fen wei san zu ,fen bie wei xin xian dui zhao zu 、leng dong ye chu li zu he leng dong -fu su zu 。tong guo PCR、qPCR、Elisadeng shi yan fang fa tan jiu bo li hua leng dong dui luan mu xi bao mtDNAkao bei shu 、3867bp(9089wei dian dao 12956wei dian )que shi 、8-OHdGhan liang yi ji β-ban ru tang gan mei huo xing de ying xiang ,jie guo ru xia :1、jing ying guang ding liang PCRjian ce ge zu luan mu xi bao mtDNAde CQzhi ,fa xian leng dong -fu su zu luan mu xi bao mtDNAde CQzhi (33.52±0.4419),xian zhe gao yu xin xian dui zhao zu (22.63±0.3404)he leng dong ye chu li zu (24.35±0.1015)(P<0.05)。ying guang ding liang CQzhi yue gao ,shui ming luan mu xi bao mtDNAkao bei shu yue di 。jie guo biao ming leng dong -fu su dao zhi luan mu xi bao mtDNAde kao bei shu fa sheng ming xian bian hua ,xian zhe di yu xin xian dui zhao zu he leng dong ye chu li zu 。you ci ke jian ,bo li hua leng dong hui shi luan mu xi bao mtDNAde kao bei shu xian zhe jian shao 。2、jing ban ding liang PCRfa jian ce ge zu luan mu xi bao mtDNA3867bppian duan de que shi qing kuang ,fa xian leng dong -fu su zu jing PCRkuo zeng hou ,luan mu xi bao mtDNAchan sheng le da liang de 3867bppian duan que shi ,zai dian yong tu zhong you xiang guan tiao dai chu xian ,er xin xian dui zhao zu he leng dong ye chu li zu wei you xiang guan tiao dai de chu xian 。3、jing Elisafa jian ce ge zu luan mu xi bao β-ban ru tang gan mei de huo xing ,fa xian leng dong -fu su zu luan mu xi bao β-ban ru tang gan mei xi guang du (0.0529±0.0002),xian zhe di yu xin xian dui zhao zu (0.0734±0.0006)he leng dong ye chu li zu (0.0756±0.0007)(P<0.05)。β-ban ru tang gan mei xi guang du yue di ,shui ming ji huo xing yue gao ,jie guo biao ming leng dong -fu su dao zhi luan mu xi bao β-ban ru tang gan mei huo xing fa sheng ming xian bian hua ,xian zhe gao yu xin xian dui zhao zu he leng dong ye chu li zu 。4、jing Elisafa jian ce ge zu luan mu xi bao mtDNAde 8-OHdGnong du bian hua ,fa xian leng dong -fu su zu luan mu xi bao mtDNAde 8-OHdGnong du (0.1538±0.0987),xian zhe gao yu xin xian dui zhao zu (0.0339±0.0007)he leng dong ye chu li zu (0.0642±0.0018)(P<0.05),er leng dong ye chu li zu luan mu xi bao mtDNAde 8-OHdGnong du ye xian zhe gao yu xin xian dui zhao zu (P<0.05)。you ci ke jian ,bo li hua leng dong ji leng dong bao hu ye chu li jun hui shi luan mu xi bao 8-OHdGnong du xian zhe zeng jia 。jie lun :bo li hua leng dong hui shi xiao shu luan mu xi bao xian li ti DNAde kao bei shu jiang di ,3867bppian duan que shi zeng duo ,mtDNAshang 8-OHdGnong du sheng gao ,β-ban ru tang gan mei huo xing sheng gao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自广西大学的张艺钟，发表于刊物广西大学2019-10-14论文，是一篇关于玻璃化冷冻论文,线粒体论文,拷贝数论文,片段论文,半乳糖苷酶论文,卵母细胞论文,小鼠论文,广西大学2019-10-14论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自广西大学2019-10-14论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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