融合蛋白GGH在小鼠体内的药效学评价

论文摘要

本课题组前期利用分子生物学技术构建长效融合蛋白（GLP-1A2G）2-HSA（GGH），体外大鼠胰岛原代细胞促增殖活性较高，正常小鼠体内量效依赖关系明显；在此基础上，本论文主要研究融合蛋白GGH对β细胞轻度损伤模型与2型糖尿病模型db/db小鼠的实验治疗学作用，为申报新药补充药理药效学资料。首先，通过血糖和对胰岛组织结构观察的筛选，在C57BL/6雄性小鼠上单剂量腹腔注射STZ120mg/kg14天后建立了一种新的模型即β细胞轻度损伤模型，成模率为88%，恢复率为86%。此模型的特点是胰岛细胞受损2周后，血糖缓慢升高达到稳定状态，高血糖水平维持2周，之后1周逐渐恢复；在模型血糖值升高时即2周时给予药物治疗，以此来检测GGH对受损胰岛细胞的促增殖作用及对高血糖恢复程度与时间的影响。其次，评价GGH对β细胞轻度损伤模型的治疗作用。每天1次皮下注射持续2周。结果GGH促进了受损β细胞的增殖，模型组增殖率为（5.2±1.8）%，GGH2、6、18mg/kg剂量组增殖率分别为（6.2±1.5）%、（8.2±0.8）%、（11.6±2.3）%；促进空腹血清胰岛素的分泌，GGH6、18mg/kg剂量组的胰岛素值为（10.8±1.3）mIU/L、（11.9±1.9） mIU/L，较模型组（8.5±1.11） mIU/L升高（P <0.05）；降低高血糖水平，GGH6、18mg/kg剂量组的空腹血糖值为（7.6±1.03） mmol/L、（6.5±0.77）mmol/L，较模型组（9.3±1.83） mIU/L降低（P <0.01），比模型组提前一周恢复正常；同时，改善了多饮、多食、多尿症状。最后，在2型糖尿病模型db/db小鼠上评价GGH药理效应与机制。经过连续6周每天一次皮下注射GGH，结果表明GGH促进了胰岛素的合成与分泌，其中GGH18mg/kg剂量组的胰岛素值为（9.47±0.83） mIU/L，较模型组（7.90±0.90）mIU/L升高（P <0.05）；促进了胰岛细胞的增殖，其中GGH6、18mg/kg剂量组增殖率分别为（8.8±1.71）%、（12.8±2.50）%，较模型组（3.5±1.29）%明显增高（P <0.01）；抑制了胰岛细胞的凋亡，其中GGH2、6、18mg/kg剂量组抑制率分别为（5.3±1.48）%、（5.0±0.71）%、（3.8±0.83）%，较模型组（12.5±1.11）%明显下降（P <0.01）；除此之外，GGH还促进了肝糖原的合成，改善了血脂代谢，缓解了胰岛素抵抗。这表明GGH对2型糖尿病发病机制的两个中心环节均有治疗作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 立题背景
• 1.1.1 糖尿病现状及发病机理
• 1.1.2 糖尿病的治疗现状
• 1.2 GLP-1 的长效性研究进展
• 1.2.1 GLP-1 简介
• 1.2.2 GLP-1 类似物与 DPP-4 抑制剂
• 1.3 GLP-1 的药效学研究
• 1.3.1 促进胰岛素的合成与分泌
• 1.3.2 增加胰岛素敏感性
• 1.3.3 抑制β细胞凋亡
• 1.3.4 刺激β细胞增生和再生
• 1.3.5 抑制胰高血糖素的分泌
• 1.4 糖尿病动物模型
• 1.4.1 化学药物诱导模型
• 1.4.2 自发性糖尿病动物模型
• 1.5 研究意义
• 1.6 研究内容
• 第二章 β细胞轻度损伤模型的筛选建立
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 动物
• 2.2.2 药品及试剂
• 2.2.3 仪器
• 2.3 方法
• 2.3.11 型糖尿病模型的建立
• 2.3.2 GGH 在 1 型糖尿病模型的评价
• 2.3.3 β细胞轻度损伤模型的分组筛选
• 2.4 统计学处理
• 2.5 结果与分析
• 2.5.1 1 型糖尿病模型的建立
• 2.5.2 GGH 在 1 型糖尿病模型的药效评价
• 2.5.3 ALX 对小鼠性别的筛选
• 2.5.4 ALX 剂量的筛选
• 2.5.5 STZ 对小鼠性别的筛选
• 2.5.6 STZ 剂量的筛选
• 2.5.7 STZ 对小鼠品系的筛选
• 2.6 本章小结
• 第三章 GGH 对β细胞轻度损伤模型的治疗研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 动物
• 3.2.2 药品及试剂
• 3.2.3 仪器
• 3.3 方法
• 3.3.1 给药剂量与实验分组
• 3.3.2 饮食、饮水、尿量的测定
• 3.3.3 空腹血糖的检测
• 3.3.4 血清胰岛素的测定
• 3.3.5 胰岛核增殖抗原 PCNA 免疫组化
• 3.4 统计学处理
• 3.5 结果与分析
• 3.5.1 GGH 对糖尿病症状的影响
• 3.5.2 GGH 对模型小鼠空腹血糖的影响
• 3.5.3 GGH 对模型小鼠空腹血清胰岛素的影响
• 3.5.4 胰岛增殖核抗原 PCNA 免疫组化
• 3.6 本章小结
• 第四章 GGH 对 2 型糖尿病模型 db/db 鼠的药理效应与机制
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 实验动物
• 4.2.2 药品及试剂
• 4.2.3 仪器
• 4.3 方法
• 4.3.1 空腹血糖、口服糖耐量的测定
• 4.3.2 全血中糖化血红蛋白的检测
• 4.3.3 血清胰岛素的测定
• 4.3.4 胰岛细胞免疫荧光
• 4.3.5 胰岛增殖核抗原 PCNA 免疫组化
• 4.3.6 TUNEL 法检测胰岛细胞凋亡
• 4.3.7 胰岛素敏感指数计算
• 4.3.8 肝糖原的测定
• 4.3.9 肝脏组织病理学检查
• 4.3.10 血清脂质的测定
• 4.4 统计学处理
• 4.5 结果与分析
• 4.5.1 GGH 降血糖药效实验
• 4.5.2 GGH 对口服糖耐量的影响
• 4.5.3 GGH 对糖化血红蛋白的影响
• 4.5.4 GGH 对胰岛素分泌不足的影响
• 4.5.5 GGH 对胰岛素抵抗的影响
• 4.6 本章小结
• 第五章 论文总结及展望
• 5.1 主要结论
• 5.2 存在问题及展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文