论文摘要
本试验共分二个系列,系列Ⅰ建立了一种快速、简便、准确、高效的测定牛奶中唾液酸（Sialic Acid）含量的方法;系列Ⅱ研究了不同时期牛奶中（初乳、常乳、末乳）的唾液酸动态变化模式及奶粉中唾液酸的含量测定。系列Ⅰ牛奶中唾液酸含量测定的方法建立建立了一种准确、简便、快速的测定牛奶中唾液酸含量的高效液相色谱法。以Symmetry C18柱（4.6mm×250mm,5μm）为固定相,柱温:35℃,以1.0%四氢呋喃水溶液（含0.2%磷酸）-乙腈（92:8）为流动相,在波长230nm处检测唾液酸的含量。分别从以下几个影响因素来优化反应条件:从扫描波长、作用时间、温度等探讨最佳反应条件。在10mL的牛奶中加入15mL的三氯乙酸可以使牛奶中的蛋白质沉淀完全,经离心后在上清液与沉淀中分别加入40mL和35mL的0.1mol/L的硫酸在80℃条件下反应120min可以使牛奶中与蛋白质结合的、与低聚糖结合的唾液酸完全释放,然后调节pH值到5,旋转蒸发,定容至10mL,过滤,取滤液1mL,再加入10mg/mL邻苯二氨盐酸盐溶液（用0.2mol/L硫酸氢钠溶液溶解）1mL,在80℃条件下,作用时间50min衍生基本反应完全。结果是线性范围为20～500μg/mL,线性回归方程式为Y=63754X-277658,相关系数r=0.9993,批内变异系数为1.49%,批间变异系数1.98%。在样品中加入低、中、高三种不同浓度的标准品溶液,所有样品的低加标量标准品的平均回收率在93.98%以上;中加标量标准品的平均回收率均在96.33%以上;高加标量标准品的平均回收率均在100.97%以上。结果表明本法简便、快速、无需梯度洗脱、分离效果好,适用于牛奶及乳品中唾液酸含量的检测和研究。系列Ⅱ不同时期牛奶中唾液酸的动态变化模式及奶粉中唾液酸含量的测定采取不同时期的牛奶（初乳、常乳、末乳）,分别检测其含量,初乳中唾液酸的总量参考值为760.83±13.42μg/mL;常乳中唾液酸总量111.43±2.06μg/mL;末乳中的唾液酸总量79.36±2.41μg/mL。奶粉中的唾液酸含量为476.4μg/g,结果表明,初乳、常乳、末乳中与蛋白质结合的唾液酸含量依次呈现下降的趋势;游离的和与低聚糖结合的唾液酸含量也呈现依次下降的趋势,但初乳中的唾液酸含量最高。