三九胃泰有效部位的筛选及其口服原位凝胶剂的研制

论文摘要

胃溃疡是消化性溃疡中最常见的一种,主要是指胃黏膜被胃液自身消化而造成的超过黏膜肌层的组织损伤。近年来,由于工作节奏加快、饮食不规律、过大的精神压力,使胃溃疡的发病率开始呈上升趋势。现代研究认为,胃溃疡的发病机制主要是由于胃黏膜的防御功能减弱和损害因子增强或两者兼有而导致溃疡形成。损害因子包括胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌、胃及十二指肠协调运动障碍等,防御因子包括胃黏膜血流量、碳酸氢盐和黏液的分泌、细胞膜的完整性、细胞再生以及前列腺素生成、消化道激素分泌等。运用中药治疗胃溃疡历史悠久,疗效确切。常见中成药主要是经过长期、大量临床使用而总结出来经验组方,在临床和患者自己购药服用过程中,中成药起到的治疗效果已得到了广大医患的普遍认可。三九胃泰是一个在市场上畅销二十多年的药界长青树,它精选三桠苦、九里香、黄芩、两面针、木香、茯苓、白芍、地黄八味中药,共奏清热燥湿、行气活血、柔肝止痛之效。三九胃泰一直为广大胃病患者所认可,有着“胃药之王”的美誉。尽管三九胃泰已在临床上应用多年,但其抗胃溃疡的主要有效部位尚不清楚,其制剂的提取工艺为传统的水煎煮法,一些水不溶性成分难免会流失。原位凝胶是指一类能以溶液状态给药后,在给药部位发生相转变,由液态转化形成非化学交联半固体凝胶的一类制剂,有利于局部给药和延缓药物释放。与其他传统的给药系统相比,原位凝胶具有良好的组织相容性,可减少给药频率,提高患者的顺应性,因其与黏膜组织的亲和力强,滞留时间长,也具有良好的缓释或控释作用。本文旨在筛选三九胃泰的有效部位,并开发其口服原位凝胶剂,为研制成分、疗效明确的中药新药奠定基础。主要研究内容包括：（1）三九胃泰有效部位的筛选；（2）大孔吸附树脂纯化三九胃泰有效部位的可行性研究；（3）三九胃泰有效部位提取与纯化工艺的优化；（4）三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂的制备；（5）三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂刺激性与药效学评价。1.三九胃泰有效部位的筛选为考察三九胃泰醇溶性部位是否具有抗胃溃疡作用,本实验将三九胃泰复方经95%乙醇与50%乙醇提取后依次用石油醚、醋酸乙酯与正丁醇萃取,剩余为水溶性部分,分别得石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物与水萃取物。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照（西米替丁与三九胃泰颗粒剂）组、石油醚萃取物组、醋酸乙酯萃取物组、正丁醇萃取组及水萃取组,按剂量灌胃给药7天,采用乙醇造大鼠胃黏膜损伤模型,以胃溃疡抑制率、胃蛋白酶活力、血清中丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）活力为检测指标,对三九胃泰醇提取物不同极性溶剂（石油醚、醋酸乙酯、正丁醇与水）萃取部位的抗胃溃疡活性进行评价。结果显示,三九胃泰各极性萃取部位均能显著抑制乙醇致大鼠胃黏膜损伤,其中石油醚萃取部位胃溃疡抑制率最高,高于西米替丁组及三九胃泰颗粒剂组。三九胃泰方各极性萃取部位均可显著降低大鼠胃蛋白酶活力,同时增强血清中SOD的活力。实验结果显示,三九胃泰不同极性萃取部位均具有显著的抗胃溃疡作用,其中石油醚萃取部位活性最强。2.大孔吸附树脂纯化三九胃泰有效部位的可行性研究为了进一步富集纯化三九胃泰的有效部位,选取AB-8型大孔吸附树脂采用不同浓度乙醇洗脱分离纯化,并设置了以下实验：（1）考察三九胃泰大孔吸附树脂有效部位对乙醇灌胃致胃溃疡模型的预防作用；（2）考察三九胃泰大孔吸附树脂有效部位对乙醇灌胃致胃溃疡模型的治疗作用。以上实验以胃溃疡抑制率、胃蛋白酶活力、MDA含量、SOD活力、NO含量、CAT活力及病理组织学检查为考察指标,对三九胃泰大孔吸附树脂有效部位抗胃溃疡活性进行评价。结果表明：（1）三九胃泰大孔吸附树脂有效部位均可显著预防与治疗乙醇致大鼠胃黏膜损伤。（2）三九胃泰大孔吸附树脂有效部位均可显著降低大鼠胃蛋白酶活力与MDA含量,增强SOD的活力与CAT的活力,升高NO含量。（3）三九胃泰大孔吸附树脂有效部位均可抑制黏膜糜烂、出血,并能预防有较大片黏膜坏死脱落、溃疡形成。这表明采用大孔吸附树脂纯化三九胃泰有效部位不影响其疗效,工艺可行。3.三九胃泰有效部位提取与纯化工艺的优化采用正交试验法,以出膏率,黄芩苷、氯化两面针碱提取率为考察指标,对三九胃泰有效部位的提取与纯化工艺进行优选。正交试验包括：（1）三九胃泰有效部位醇提工艺的优选；（2）大孔吸附树脂纯化工艺优选。最终确定三九胃泰的提取工艺为：用8倍量95%乙醇提取1.5 h,再用8倍量50%乙醇,提取3次,每次0.5 h,合并滤液,蒸干,得醇提取物。接着采用大孔吸附树脂将醇提取物纯化,其工艺为：①固液比为1：20,洗脱液乙醇浓度为50%,流速为2 ml·min-1,洗脱用量：4倍体积。②洗脱液乙醇浓度为80%,流速为3 ml·min-1,洗脱用量为5倍体积。4.三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂的制备进一步将三九胃泰有效部位制备为干混悬剂型口服原位凝胶剂。首先采用单因素试验对凝胶基质、助悬剂、填充剂及润湿剂进行了考察,在此基础上运用多因素试验优化处方。最佳处方工艺为：400 g三九胃泰有效部位、500 g去乙酰结冷胶、100 g羧甲基纤维素钠、50 g阿斯帕坦,加甘露醇至10000 g,所有辅料过100目筛并混匀,以95%乙醇为润湿剂,16目筛制粒,于60℃烘箱干燥后,12目整粒,即得。所制备的口服原位凝胶释药特征符合Higuchi方程,具有缓释作用。5.三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂刺激性与药效学评价对三九胃泰有效部位口服原位凝胶的黏膜刺激性进行了评价,并采用乙醇灌胃造模法,以胃黏膜的损伤程度,胃液和胃组织中胃蛋白酶、SOD、MDA、NO和CAT为指标考察了三九胃泰有效部位口服原位凝胶的抗溃疡药效。结果显示,三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂无明显黏膜刺激性,可显著抑制乙醇致大鼠胃黏膜损伤。综上所述,本课题筛选了三九胃泰方的有效部位,首次发现除水溶性成分,方中的脂溶性成分也同样具有较强的抗胃溃疡作用。设计并优化了三九胃泰有效部位的提取、纯化工艺,在此基础上,制备了三九胃泰有效部位的新剂型’—干混悬型口服原位凝胶剂,并对其刺激性与药效进行了初步评价,为该中药胃药新制剂的后续开发及临床应用奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 第二章 三九胃泰有效部位的筛选
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 1.3 动物
• 2 方法与结果
• 2.1 不同极性萃取部位的制备
• 2.2 动物分组及给药
• 2.3 药效学指标检测
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 大孔吸附树脂纯化三九胃泰有效部位的可行性研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 1.3 动物
• 2 方法与结果
• 2.1 三九胃泰醇提物的制备
• 2.2 大孔吸附树脂纯化三九胃泰醇提取物
• 2.3 三九胃泰有效部位预防胃溃疡作用研究
• 2.4 三九胃泰有效部位治疗胃溃疡作用研究
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 三九胃泰有效部位提取与纯化工艺的优化
• 1 仪器与试剂
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 样品分析方法的建立
• 2.2 三九胃泰醇提工艺的优化
• 2.3 大孔吸附树脂纯化工艺的优化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂的制备
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 处方工艺设计
• 2.2 单因素试验
• 2.3 多因素试验
• 2.4 体外释放度的测定
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂刺激性与药效学评价
• 1. 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 1.3 动物
• 2 实验方法
• 2.1 三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂黏膜刺激性试验
• 2.2 三九胃泰有效部位口服原位凝胶剂抗溃疡作用考察
• 3 讨论
• 4 小结
• 第七章 全文总结与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 英文缩略词对照表
• 攻读硕士学位期间成果
• 致谢