黄酮及其磷酰化产物与ctDNA弱相互作用的研究及人肺癌组织中热休克蛋白70的纯化

论文摘要

核酸和蛋白质一样,都是生命活动中的生物信息大分子,作为“遗传大分子”的核酸在生物体的生长、繁殖、遗传、变异和转化等生命过程中起着决定性的作用。许多分子能与核酸发生相互作用,破坏其模板作用,使核酸链断裂,进而影响基因调控和表达功能。因此,有关核酸与其探针化合物即靶向分子相互作用的研究,一直是受到人们关注的研究领域。研究小分子特别是一些具有抗肿瘤、抗病毒等药物与核酸的相互作用,对于了解它们的作用机理,药物体外筛选、致癌物的致癌机理的研究都有非常重要的意义。黄酮类化合物是一类存在于多种植物中的多酚化合物,研究发现它们具有广泛的药物活性,如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗炎等活性。 论文第一部分用紫外、荧光法分别研究了7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物（磷酰化7-羟基黄酮、磷酰化5,7-二羟基黄酮）在液态环境中与小牛胸腺DNA（ctDNA）的弱相互作用情况。结果显示:7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物均能在一定的浓度范围内与ctDNA发生弱相互作用,但与黄酮相比,磷酰化产物对ctDNA更具亲和力。根据文献求得7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物与ctDNA结合的平衡常数,分别为:7-羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为0.865×105L/mol;磷酰化7-羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为1.52×105L/mol;5,7-二羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为1.40×105L/mol;磷酰化5,7-二羟基黄酮与ctDNA结合的平衡常数为9.32×105L/mol。根据Stern-Volmer方程算出不同温度下7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数分别为:7-羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为K25℃=601 L/mol,K37℃=547L/mol;磷酰化7-羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为K25℃=1381 L/mol,K37℃=1253L/mol;5,7-二羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为K25℃=2576L/mol,K37℃=2238 L/mol;磷酰化5,7-二羟基黄酮对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数为K25℃=30860 L/mol,K37℃=27760 L/mol。实验数据证明随着温度的升高,7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物对ctDNA-EB体系的荧光猝灭常数降低,说明它们对ctDNA-EB体系的荧光猝灭为静态猝灭,7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及其磷酰化产物与ctDNA间形成了复合物。本部分论文还根据Scatchard方程求得7-羟基黄酮、磷酰化7-羟基黄酮、5,7-二羟基黄酮及磷酰化5,7-二羟基黄酮存在时,核苷酸上每一位点固有的结合常数K分别为:2.07×104L/mol、3.19×104L/mol、2.94×104L/mol、5.31×104L/mol;每个核苷酸上的成键位点数n分别为:0.54、0.45、0.37、0.29。另外还根据紫外及荧光数据初步推断出在实验条件下7-羟基黄酮、磷酰化7-羟

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 第一部分 7-羟基黄酮、5’7-二羟基黄酮及其磷酰化产物与小牛胸腺DNA（ctDNA）相互作用的研究
• 1.前言
• 1.1 黄酮类天然产物的研究概况
• 1.2 磷酰化黄酮的合成和结构表征
• 1.3 核酸与探针分子的相互作用研究概况
• 1.4 本部分论文的研究目的和主要内容
• 2.7-羟基黄酮、5，7-二羟基黄酮及其磷酰化产物与ctDNA的弱相互作用研究
• 2.1 引言
• 2.2 紫外、荧光光谱法对比研究磷酰化7-羟基黄酮及7-羟基黄酮与ctDNA的弱相互作用
• 2.2.1 实验部分
• 2.2.2 结果与讨论
• 2.2.3 小结
• 2.3 紫外、荧光光谱法研究磷酰化5，7-二羟基黄酮、5，7-二羟基黄酮与ctDNA的弱相互作用
• 2.3.1 实验部分
• 2.3.2 结果与讨论
• 2.3.3 小结
• 3.结论
• 参考文献
• 第二部分 人肺癌组织中热休克蛋白70的纯化
• 1.前言
• 1.1 热休克蛋白70（HSP70）研究概况
• 1.1.1 热休克蛋白70的功能
• 1.1.2 热休克蛋白70的纯化方法
• 1.2 本部分论文的研究意义和主要内容
• 2.热休克蛋白70（HSP70）的纯化、分析及鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 ConA-Sepbarose柱层析结果
• 2.2.2 DEAE柱离子交换层析结果
• 2.2.4 HSP70的得率
• 2.3 讨论
• 参考文献
• 硕士期间发表及待发表的文章
• 致谢