咪唑啉酮类除草剂降解菌的分离鉴定及降解特性研究

咪唑啉酮类除草剂降解菌的分离鉴定及降解特性研究

论文摘要

咪唑啉酮类除草剂是20世纪80年代美国氰胺公司发现的一类高效广谱性除草剂,其中咪唑乙烟酸(Imazethapyr)和甲氧醚草烟(Imazamox)使用广泛,但是长期使用后会导致土壤残留量增加,影响后茬作物的正常生长。残留在土壤中的除草剂主要是由微生物降解。本研究从药害土壤中分离甲氧醚草烟和咪唑乙烟酸高效降解菌23株,对降解菌进行生物学鉴定,然后通过高效液相色谱研究高效降解菌的降解特性,并尝试克隆相关的基因,初步研究结果如下:从药害土壤中分离得到甲氧醚草烟和咪唑乙烟酸降解菌23株,其中甲氧醚草烟降解细菌8株,分别分别命名为IB1-8,真菌6株,分别分别命名为IF1-6;咪唑乙烟酸降解细菌5株,分别命名为HB1-5,真菌4株,分别命名为HF1-4。通过高效液相色谱法检测降解效率,其中细菌培养48h的降解率IB1-8为27.32-92.46%,HB1-HB5为24.67-45.12%,真菌培养7天降解率IF1-6为12.45-20.11%,HF1-HF4为9.12-25.78%。通过形态学和生理生化初步鉴定了细菌12株,真菌10株,其中IB1和IB2属于土壤杆菌属(Agrobacterium), IB3和HB2属于短杆菌属(Brevibacterium), IB 5属于不动杆菌属(Acinetobacter), IB6和IB7属于棒状杆菌属(Coryynebacterium), HB1和HB3属于假单胞菌属(Pseudomonas), HB4属于微球菌属(Micrococcus), HB5属于链球菌属(Streptococcus)。降解真菌通过不同培养基形态和染色后镜检后鉴定IF1、IF4、HF1同属于曲霉菌(Aspergillus),IF2、IF3、IF6和HF2同属于青霉菌(Penicillium), IF5初步鉴定为木霉菌(Trichoderma),HF3属于毛霉菌(Mucor),HF4属于根霉菌(Rhizopus)。在这些降解菌株中IB5降解效率最高,对其进行分子生物学鉴定和降解特性研究,并尝试克隆降解基因。降解菌株IB5在农药加无机盐的液体培养基中培养,IB5从6h开始进入对数生长期,18h进入稳定期,生长速度较快;该菌株温度的适应范围较广,在温度为25-40℃的条件下均能生长,最适生长温度为37℃;菌株在pH为5.0-9.0之间可以生长,最适pH值为7.0左右;在最适条件下测定降解效率,发现随着菌体数量的增加,培养液中的除草剂残留量逐渐减少,培养48h以后,培养液中的药液含量从800mg/L降低到60.32mg/L,降解效率达到92.46%,具有较高的降解效率。IB5通过16SrDNA序列比对分析并应用MEGA4构建系统发育图谱,发现其与不动杆菌属的鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)的16SrDNA序列的同源性最高,保守区相似性为99%,结合菌体形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果确定IB5属于不动杆菌属,为鲍曼不动杆菌株,该菌属未有降解除草剂的相关报道。由于IB5降解效率较高,所以应用转座子标签和TAILPCR技术克隆降解基因。通过Tn5转座质粒pSZ21构建IB5降解缺陷型文库,得到418个具有降解缺陷型的菌株。以缺陷型菌株DNA为模板,应用TAIL-PCR技术得到1267bp的序列,分析后这段序列与新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)的二酚氧化酶(diphenol oxidase)的同源性达到97%,该类氧化酶主要是通过分子氧氧化酚形成对应的醌,可能在甲氧醚草烟的降解过程中起到一定的作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 目录
  • 第1章 绪论
  • 1.1 我国长残效除草剂应用概述
  • 1.2 除草剂在土壤环境中的归趋
  • 1.3 除草剂微生物降解和土壤生物修复作用
  • 1.3.1 降解除草剂微生物类群
  • 1.3.2 微生物降解除草剂机理
  • 1.3.3 除草剂降解酶、降解基因及其相关代谢方式
  • 1.4 咪唑啉酮类除草剂概况
  • 1.4.1 甲氧醚草烟
  • 1.4.2 咪唑乙烟酸
  • 1.4.3 咪唑啉酮类除草剂在我国的使用现状及其药害
  • 1.5 本研究目的意义
  • 1.6 研究内容和技术路线图
  • 1.6.1 研究主要内容
  • 1.6.2 技术路线图
  • 第2章 甲氧醚草烟降解菌的分离鉴定及降解特性研究
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 土样采集
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.1.3 培养基成分及其配制
  • 2.1.4 主要仪器设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 降解菌株的富集驯化
  • 2.2.2 降解菌株的分离
  • 2.2.3 降解细菌鉴定
  • 2.2.4 降解真菌鉴定
  • 2.2.5 降解效率测定
  • 2.2.6 高效降解菌降解特性研究
  • 2.2.7 降解菌对敏感作物降解修复研究
  • 2.2.8 高效降解菌的抗生素敏感性试验
  • 2.2.9 高效降解菌株的降解广谱性研究
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 降解菌株筛选结果
  • 2.3.2 甲氧醚草烟标准曲线
  • 2.3.3 降解菌的降解效率测定
  • 2.3.4 降解菌的鉴定
  • 2.3.5 高效降解菌IB5降解特性研究
  • 2.3.6 甲氧醚草烟降解细菌敏感作物降解菌修复研究
  • 2.3.7 降解细菌的抗生素敏感性
  • 2.3.8 降解细菌降解广谱性研究
  • 2.4 本章小结
  • 第3章 咪唑乙烟酸降解菌的分离鉴定以降解效率测定
  • 3.1 实验材料
  • 3.1.1 土样采集
  • 3.1.2 主要试剂
  • 3.1.3 培养基成分及其配制
  • 3.1.4 主要仪器设备
  • 3.2 实验方法
  • 3.2.1 降解菌株的富集驯化
  • 3.2.2 降解菌株的分离
  • 3.2.3 降解细菌鉴定
  • 3.2.4 降解真菌鉴定
  • 3.2.5 降解效率测定
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 降解菌株筛选结果
  • 3.3.2 咪唑乙烟酸标准曲线
  • 3.3.3 降解菌的降解效率测定
  • 3.3.4 降解菌的鉴定
  • 3.4 本章小结
  • 第4章 甲氧咪草烟降解菌IB5相关降解基因克隆
  • 4.1 实验材料
  • 4.1.1 菌株和质粒
  • 4.1.2 主要试剂
  • 4.1.3 主要仪器设备
  • 4.2 实验方法
  • 4.2.1 质粒的提取
  • 4.2.2 质粒消除
  • 4.2.3 琼脂糖电泳检测
  • 4.2.4 感受态细胞的制备
  • 4.2.5 质粒转化
  • 4.2.6 突变体文库构建
  • 4.2.7 缺陷型菌株基因组DNA提取
  • 4.2.8 TAIL-PCR克隆降解基因
  • 4.3 结果与分析
  • 4.3.1 IB5质粒及其消除
  • 4.3.2 降解功能缺陷型文库的构建
  • 4.3.3 转座子Tn5右翼序列克隆
  • 4.3.4 转座子Tn5左翼序列克隆
  • 4.3.5 克隆基因分析
  • 4.4 本章小结
  • 第5章 讨论
  • 5.1 咪唑啉酮类除草剂降解微生物
  • 5.1.1 降解细菌及其降解能力形成
  • 5.1.2 降解真菌及其降解途径
  • 5.1.3 细菌与真菌降解能力的差异比较
  • 5.2 除草剂降解菌最适生长条件与田间应用条件关系
  • 5.3 降解菌株的降解广谱性实践意义
  • 5.4 降解基因与工程菌株的应用前景
  • 第6章 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 攻读学位期间学术成果
  • 致谢
  • 相关论文文献

    • [1].聚乳酸/聚己二酸-对苯二甲酸丁二酯对土壤细菌群落结构的影响及其降解菌的筛选[J]. 微生物学通报 2020(02)
    • [2].邻苯二甲酸二甲酯降解菌的研究进展[J]. 高师理科学刊 2019(02)
    • [3].萘降解菌的分离、鉴定及降解特性的研究[J]. 中国酿造 2017(02)
    • [4].1株大分子有机物降解菌的分离、鉴定及酶学分析[J]. 江苏农业科学 2017(05)
    • [5].一株萘污染降解菌的分离鉴定及在污染土壤中降解效果的研究[J]. 职业与健康 2017(13)
    • [6].润滑油降解菌的分离筛选与鉴定[J]. 广州化工 2017(13)
    • [7].萘降解菌的分离及其联合修复作用的研究进展[J]. 环境科学与技术 2017(07)
    • [8].一株耐低温原油降解菌的分离鉴定及降解特性[J]. 浙江农业学报 2016(10)
    • [9].秸秆降解菌的筛选及对秸秆的降解效果[J]. 生态学杂志 2020(04)
    • [10].互营烃降解菌系的短链脂肪酸降解特性[J]. 应用与环境生物学报 2020(04)
    • [11].玉米秸秆降解菌的筛选[J]. 再生资源与循环经济 2018(11)
    • [12].一株苦马豆素降解菌的分离与鉴定[J]. 西北农业学报 2016(10)
    • [13].原油微生物群落构成及降解菌降解特性的研究[J]. 生物技术通报 2013(01)
    • [14].营养要素对原油降解菌生长的影响[J]. 生物技术 2009(02)
    • [15].聚乳酸降解菌的分离鉴定及其产酶和降解特性[J]. 精细化工 2020(03)
    • [16].餐饮油烟废气降解菌种的选育研究[J]. 环境与发展 2019(12)
    • [17].高效多环芳烃降解菌的筛选、鉴定及降解特性分析[J]. 上海农业学报 2020(01)
    • [18].一株土霉素降解菌的筛选鉴定及性能研究[J]. 环境科学导刊 2020(05)
    • [19].2株柴油降解菌的分离筛选及生长特性分析[J]. 浙江师范大学学报(自然科学版) 2019(01)
    • [20].氯霉素降解菌的筛选与降解性能[J]. 医学动物防制 2017(08)
    • [21].毒死蜱降解菌的筛选·鉴定·降解特性[J]. 安徽农业科学 2017(19)
    • [22].2株毒死蜱降解菌的分离鉴定及其混合降解特性研究[J]. 热带作物学报 2017(08)
    • [23].聚丙烯酰胺降解菌的研究进展及展望[J]. 化工管理 2015(04)
    • [24].三唑磷降解菌的分离鉴定及降解特性[J]. 南方农业学报 2015(04)
    • [25].鲭鱼中组胺降解菌的筛选鉴定和发酵条件初探[J]. 中国食品学报 2014(08)
    • [26].一株萘降解菌的分离及其在石油降解中耐盐性的研究[J]. 长春师范学院学报 2013(04)
    • [27].北极表层海水中氯代十六烷降解菌的多样性[J]. 微生物学报 2012(08)
    • [28].多菌灵降解菌系的筛选与组成分析及其对土壤中多菌灵的降解[J]. 中国农业科学 2012(23)
    • [29].百草枯降解菌研究初报[J]. 湖北农业科学 2011(16)
    • [30].稠油降解菌的筛选及特性研究[J]. 石油炼制与化工 2010(07)

    标签:;  ;  ;  

    咪唑啉酮类除草剂降解菌的分离鉴定及降解特性研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢