仙人掌注射液的研制及其指纹图谱研究

论文摘要

本实验选择近年来在畜禽疾病治疗上,民间广泛使用的植物药仙人掌作为研究对象,采用三种不同方法初步探索其注射液制剂工艺,并通过稳定性试验、肌肉刺激性试验、溶血性试验、急性毒性替代试验和相关物质检查试验,对三种方法制备的注射液进行综合评价,确定仙人掌注射液的最终制备工艺；在此基础上对最后确定工艺的注射液进行了高效液相色谱指纹图谱研究,以期为该注射液的质量控制进行探索。1以四川产野生仙人掌药材为原料,以总黄酮含量为考察指标进行了仙人掌注射液的研制。在研制过程中采用了传统的水提醇沉法、超声波辅助提取法和大孔树脂吸附法三种制备工艺。2通过对三种不同工艺制备的仙人掌注射液进行稳定性试验、肌肉刺激性试验、溶血性试验和相关物质检查试验,而后比较分析试验结果,可知大孔树脂吸附法制备工艺明显优于其他两种,因此本实验最后确定仙人掌注射液的制备工艺为：用超声波辅助提取法制备总黄酮含量为0.72mg·mL-1左右的仙人掌提取液,调pH为7.0后以1BV·h-1的速度流经AB-8型大孔树脂柱,上样体积为3BV,吸附完全后用蒸馏水洗至流出液无糖反应,再用3BV 70%乙醇以2BV·h-1的速度进行洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇至无醇味,加水适量,静置24h过滤,滤液加吐温-80和EDTA,使其最终含量分别为0.25%和0.01%,最后加注射用水使注射液浓度为1g生药每毫升,调pH至7.0,精滤,灌封,流通蒸汽灭菌30min。3按照国家食品药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》（暂行）的要求,本实验采用高效液相色谱法,对仙人掌注射液、注射液中间体和仙人掌药材进行了指纹图谱研究。色谱条件为：Agilent TC-C18（2）分析柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇（A）-2%冰醋酸水溶液（B）,梯度洗脱,0-5min,5%A,5-70min,5%-40%A,70-80min,40%-50%A,80-90min,50%-55%A:流速：1mL.min-1:进样量：10μL；柱温：25℃；检测波长：340nm。应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）,分别建立了仙人掌注射液、注射液中间体和仙人掌药材的对照指纹图谱,不同批次的以上样品与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。本法能有效控制仙人掌注射液的质量。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述及选题背景
• 1 文献综述
• 1.1 仙人掌概述
• 1.1.1 仙人掌植物学介绍
• 1.1.2 仙人掌在古文献中的记载
• 1.1.3 仙人掌在兽医临床上的应用
• 1.1.4 仙人掌药物制剂开发现状
• 1.2 仙人掌总黄酮研究概述
• 1.2.1 仙人掌黄酮类化合物
• 1.2.2 仙人掌黄酮药理作用研究
• 1.3 中药指纹图谱研究
• 1.3.1 中药指纹图谱的概念
• 1.3.2 指纹图谱在评价中药质量中的作用
• 1.3.3 中药指纹图谱的研究现状
• 1.3.4 中药指纹图谱的发展前景
• 2 课题研究的目的意义
• 第二部分 实验内容
• 第一章 仙人掌注射液制备工艺初探
• 1 材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 仪器及其它
• 2 方法
• 2.1 仙人掌预处理
• 2.2 仙人掌总黄酮含量测定
• 2.2.1 标准曲线绘制
• 2.2.2 总黄酮含量测定
• 2.3 水提醇沉法制备仙人掌注射液
• 2.3.1 仙人掌总黄酮提取液的制备
• 2.3.2 正交法优化仙人掌总黄酮提取条件
• 2.3.3 正交法优化仙人掌注射液配制工艺
• 2.3.4 最佳抗氧化剂的选择
• 2.3.5 仙人掌注射液的制备
• 2.4 超声波辅助提取法制备仙人掌注射液
• 2.4.1 单因素对超声波辅助提取法提取仙人掌总黄酮的影响
• 2.4.2 正交法优化超声波辅助提取法提取仙人掌总黄酮的条件
• 2.4.3 超声提取次数对仙人掌总黄酮提取效果的影响
• 2.4.4 仙人掌注射液的制备
• 2.5 大孔树脂吸附法制备仙人掌注射液
• 2.5.1 AB-8大孔树脂的预处理
• 2.5.2 仙人掌总黄酮提取液的制备
• 2.5.3 AB-8树脂吸附仙人掌总黄酮的工艺参数考察
• 2.5.4 仙人掌注射液的制备
• 3 结果
• 3.1 水提醇沉法制备仙人掌注射液实验结果
• 3.1.1 仙人掌总黄酮最佳提取条件的确定
• 3.1.2 仙人掌注射液配制工艺优化结果
• 3.1.3 最佳抗氧化剂的确定
• 3.1.4 水提醇沉法制备的仙人掌注射液性状
• 3.2 超声波辅助提取法制备仙人掌注射液实验结果
• 3.2.1 单因素考察实验结果
• 3.2.2 仙人掌总黄酮超声波辅助提取法最佳提取条件的确定
• 3.2.3 超声波辅助提取法提取仙人掌总黄酮提取次数的确定
• 3.2.4 超声波辅助提取法制备的仙人掌注射液性状
• 3.3 大孔树脂吸附法制备仙人掌注射液实验结果
• 3.3.1 AB-8树脂吸附仙人掌总黄酮的工艺筛选结果
• 3.3.2 大孔树脂吸附法制备的仙人掌注射液性状
• 4 分析讨论
• 4.1 关于总黄酮含量测定
• 4.2 关于水提醇沉法制备工艺
• 4.3 关于注射液配制工艺
• 4.4 关于超声波辅助提取法制备工艺
• 4.5 关于大孔树脂吸附法制备工艺
• 第二章 仙人掌注射液最佳工艺的确立
• 1 材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 仪器与设备
• 1.3 实验动物
• 2 方法
• 2.1 仙人掌注射液稳定性试验
• 2.1.1 加速试验
• 2.1.2 光照对仙人掌注射液稳定性的影响
• 2.2 仙人掌注射剂安全性检测
• 2.2.1 肌肉刺激性试验
• 2.2.2 溶血性试验
• 2.2.3 注射液有关物质检查试验
• 2.3 大孔树脂吸附法制备的仙人掌注射液急性毒性替代试验
• 2.3.1 预试实验
• 2.3.2 正式实验
• 3 结果
• 3.1 仙人掌注射液稳定性试验结果
• 3.1.1 加速试验结果
• 3.1.2 光照对仙人掌注射液稳定性的影响
• 3.2 仙人掌注射剂安全性检测试验结果
• 3.2.1 肌肉刺激性试验结果
• 3.2.2 溶血性试验
• 3.2.3 注射液有关物质检查试验结果
• 3.3 大孔树脂吸附法制备的仙人掌注射液急性毒性替代试验结果
• 4 分析讨论
• 4.1 关于稳定性
• 4.2 关于安全性检测
• 4.3 仙人掌注射液最佳制备工艺的确立
• 4.4 关于急性毒性替代试验
• 第三章 仙人掌注射液HPLC指纹图谱研究
• 1 材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 仪器与设备
• 2 方法与结果
• 2.1 指纹图谱测定方法研究
• 2.1.1 供试品的制备
• 2.1.2 色谱柱的选择
• 2.1.3 流动相的选择
• 2.1.4 检测波长的选择
• 2.1.5 柱温的选择
• 2.1.6 指纹图谱记录时间的选择
• 2.1.7 色谱条件的确定
• 2.1.8 指纹图谱测定方法的方法学考察
• 2.2 仙人掌药材指纹图谱研究
• 2.2.1 来源
• 2.2.2 仙人掌药材供试品制备条件优化
• 2.2.3 仙人掌药材指纹图谱的建立
• 2.3 仙人掌注射液中间体指纹图谱研究
• 2.3.1 仙人掌注射液中间体供试品的制备
• 2.3.2 仙人掌注射液中间体指纹图谱的建立
• 2.4 仙人掌注射液指纹图谱研究
• 2.4.1 仙人掌注射液供试品的制备
• 2.4.2 仙人掌注射液指纹图谱的建立
• 2.5 仙人掌药材、中间体及注射液的相关性研究
• 3 分析与讨论
• 3.1 关于参照物的确定
• 3.2 关于指纹图谱测定条件
• 3.3 关于指纹图谱
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录